Обнаружение бледной трепонемы. Бледная трепонема (Treponema pallidum) — возбудитель сифилиса: микробиология, антигенные свойства, иммунитет, общая информация о диагностике сифилиса

Сифилис — хроническое венерическое заболевание, характеризующееся последовательной сменой отдельных периодов болезни. Возбудитель сифилиса был. открыт в 1905 г. немецким ученым Шаудином.

Морфология и биологические свойства. Treponema pallidum представляет собой тонкую извитую нить размером 15x0,25—0,5 мкм, имеющую 8—14 равномерных витков спирали, расположенных близко друг к другу. С трудом окрашивается анилиновыми красками и поэтому получила название бледной спирохеты. Для окраски используют метод Романовского — Гимзы (спирохеты окрашиваются в бледно-розовый цвет), негативное окрашивание раствором туши (спирохеты остаются неокрашенными и видны на темном фоне). Для выявления спирохет в инфицированных тканях используют метод импрегнации серебром (метод Левадити), при котором трепонемы, окрашенные в черный цвет, видны на фоне желтых клеток ткани. При исследовании материала в темном поле зрения бледная спирохета отличается от сапрофитных спирохет, встречающихся на слизистых оболочках полости рта и половых органов, равномерными завитками, плавными волнообразными движениями.

Она тоньше других трепонем, способна сгибаться под углом и совершать характерные маятникообразные движения. Культивируется возбудитель сифилиса с трудом, в анаэробных условиях. Для выращивания используют среды, содержащие кроличью или лошадиную сыворотку (среды Уленгута и Терских). При этом культуральные (полученные на питательных средах) штаммы спирохет теряют вирулентность и изменяют антигенную структуру. Трепонемы содержат эндотоксин, имеют сложное антигенное строение.

Устойчивость. Бледная спирохета вне тканей больного быстро погибает, неустойчива при высушивании, действии обычных дезинфицирующих веществ и высокой температуры; даже при 40°С погибает через 2 ч. К низким температурам более устойчива: выдерживает замораживание до года.

Патогенность. В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Экспериментально удается заразить обезьян, кроликов, хомяков.

Патогенез и клиника. Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки и кожа, имеющие самые незначительные повреждения. Инкубационный период продолжается в среднем 3—4 нед, после чего наступает первичный период сифилиса: на месте внедрения возбудителя появляется небольшая эрозия, приподнятая над кожей, с ровными краями, гладким блестящим дном, розового или красного цвета, часто безболезненная, с плотным инфильтратом у основания, из-за которого она и получила название «твердый шанкр». Возникают недомогание, головная боль. Лимфатические узлы увеличиваются, становятся плотными без видимых признаков воспаления. Они, как правило, не спаяны с окружающими тканями. Через 20—30 дней твердый шанкр заживает.

Спирохеты из лимфатических узлов проникают в кровь, размножаются и заносятся в органы и ткани и могут вызвать их поражения. Через 6—7 нед от начала заболевания развивается вторичный период сифилиса, характеризующийся генерализацией процесса и появлением обильных и разнообразных высыпаний на коже и слизистых оболочках (сифилиды) розовых или красных тонов, Сифилиды могут возникать в виде розеол, папул, везикул, пустул. Если лечение не проводится, то через 2— 3 года наступает третий период сифилиса — гуммозный. Возникает бугорковый сифилид, или глубокий узловой сифилид (подкожная гумма). На коже и слизистых оболочках появляются плотные шаровидные бугорки. Они могут существовать неопределенно долгое время, а затем рассасываются или изъязвляются с последующим образованием рубца. При образовании сифилитической гуммы в подкожной жировой клетчатке появляется узел, который увеличивается, спаивается с окружающей клетчаткой и с кожей. Над центральной частью гуммы кожа истончается и она вскрывается. Гумма превращается в гуммозную язву с неприятным запахом: дно ее покрыто некротическим распадом. В течение нескольких месяцев язва заживает и на ее месте остается втянутый звездчатый рубец. В последнем, четвертом, парасифилитическом периоде, который может наступить через 10—20 лет после начала заболевания, наблюдаются специфические поражения центральной нервной системы в форме прогрессивного паралича или спинной сухотки.

Иммунитет. Естественный, врожденный, иммунитет отсутствует: заражение всегда приводит к развитию заболевания. Вопрос о состоянии приобретенного иммунитета до конца не изучен. Во время болезни вырабатывается не¬стерильный иммунитет, носящий характер клеточного, тканевого. Его называют противошанкерным, так как при повторном заражении во время болезни новый шанкр не появляется, а спирохеты распространяются по всему организму, принимая участие в развитии последующих сифилитических поражений.

Микробиологическая диагностика. Основные методы лабораторной диагностики — микроскопический и серо-логический. В первый период проводят микроскопию серозного содержимого твердого шанкра в темном поле или в мазках, окрашенных по Романовскому — Гимзе. Микроскопическому исследованию подвергают также отделяемое кожных поражений вторичного и третичного периодов. Начиная с 5—6-й недели от момента заражения или на 2—3-й неделе после появления твердого шанкра используют серологические методы диагностики. Применяют РСК (реакцию Вассермана) и осадочные реакции (реакции преципитации) Кана и Закса — Витебского. Реакцию Вассермана ставят с сывороткой больного, используя неспецифические антигены (спиртовой экстракт липоидов из бычьего сердца с добавлением холестерина, или кардиолипиновый антиген), так как оказалось, что глобулины сыворотки больного сифилисом способны соединяться липоидными вытяжками, полученными из различных органов. Наряду с неспедифическими используют специфический антиген, полученный из ткани яичка кролика, зараженного бледной трепонемой. При отсутствии гемолиза реакцию считают положительной, так как очевидно, что комплемент связался со специфической системой антиген — антитело. Осадочные реакции просты по технике постановки. Суть их заключается в том, что при добавлении к сыворотке больного концентрированного липоидного антигена появляются помутнение, а затем и осадок. Ввиду того что антигены в этих реакциях неспецифичны, они могут быть положительны и при других инфекционных заболеваниях (туберкулез, малярия и др.).

Наиболее специфичной в серологической диагностике сифилиса является реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Эта реакция основана на том, что при добавлении сыворотки больного сифилисом к тканевой культуре трепонем (культивируемых в яичнике кролика) они в присутствии комплемента теряют подвижность. Наряду с этой реакцией используется также непрямая РИф. Основными компонентами для постановки этой реакции являются: сыворотка больного (разведенная 1:200), тканевый штамм бледной спирохеты, антивидовая флюоресцирующая сыворотка против глобулинов человека.

Единственным источником инфекции является человек во все периоды болезни. Путь передачи — непосредственный контакт с больным (чаще всего при половом сношении), реже—через предметы обихода. Возможна передача инфекции новорожденному через плаценту от больной матери.

Профилактика и лечение. В СССР перед врачами поставлена задача ликвидации сифилиса. Для этого имеются все предпосылки: непрерывный рост благосостояния и культурного уровня жизни трудящихся, а также такие меры борьбы, как привлечение к обследованию и лечению лиц, являющихся источником заражения, и контактировавших с ними, массовые профилактические осмотры, диспансерные методы работы. Существенную роль в профилактике играют раннее выявление источников инфекции, своевременное лечение, ликвидация беспорядочных половых связей. Специфическая профилактика не проводится.

Для лечения применяют новарсенол, препараты висмута, ртути, пенициллин.

Или бледная трепонема это микроорганизм в виде спирали с 8-12 завитков, который имеет клетчатую мембрану, благодаря чему определенный период времени может не терять своей патогенности под влиянием факторов окружающей среды.

Бактерия относится к спирохетам и является возбудителем такого заболевания, как сифилис.

Характеризующие особенности возбудителя

Попав в окружающую среду со слюной, спермой или выделениями из эрозий и язв больного, бледная трепонема способна сохранять свою активность до тех пор, пока не произойдет высыхание вещества, в котором трепонема пребывает.

Возбудитель устойчив к действию высоких температур, 54 градуса выше нуля уничтожают возбудителя только через 15 минут, более высокие цифры становятся пагубными для трепонемы паллидум быстрее. Даже во время кипячения возбудитель не теряет своей активности в течение нескольких секунд. Интересным фактом является то, что при температуре 42 градуса трепонема становится более активной и лишь со временем погибает. Возбудитель сифилиса считается патогенным в течение трех суток, даже если находится в трупном материале.

Высоким уровнем устойчивости обладает бледная спирохета и к воздействию низких температурных показателей, даже в замороженном виде она сохраняет свою патогенность в течение 12 месяцев. Лучшими условиями проживания возбудителя является бескислородная среда и низкая температура.

Бледная трепонема погибает под воздействием дезинфицирующих и некоторых видов антибактериальных средств. Неблагоприятными для бледной спирохеты (приводят к ее гибели) являются:

• мышьяк и висмут;
• пенициллин;
• ртуть;
• влияние кислот и щелочей;
• попадание на микроорганизм света и ультрафиолетового облучения;
• антисептические растворы.

Однако выводы проведенных исследований по устойчивости возбудителя сифилиса к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды указывают на то, что трепонема в некоторых случаях все же может сохранять свою активность и вызывать заболевание даже при проникновении к ней кислорода, при высушивании и попадании лучей света.

Пути передачи

Входными воротами, через которые проникает возбудитель в наш организм, считается травмированная тканевая поверхность слизистых оболочек ротовой полости или половых органов.

Передача бледной трепонемы происходит:

• Половым путем — при незащищенных половых отношениях с больным.
• Бытовым — в результате использования загрязненных полотенец, белья, косметических средств.
• Трансплацентарным — от больной матери к ребенку.
• Вертикальным — при прохождении ребенка через инфицированные родовые пути матери.
• Гематогенным — при проведении переливания крови и ее компонентов, при оперативных вмешательствах, использовании общего шприца с больным человеком (особенно характерно для наркоманов).

Необходимо заметить, что достаточно высокий риск инфицирования у работников медицинских и косметических заведений, особенно если они осуществляют проведение процедур, связанных с нарушением целостности кожного покрова.

Наибольшее количество случаев заражения диагностируется у лиц, имеющих беспорядочную половую жизнь и не использующих контрацептивов.

Клинические проявления болезни

Обратите внимание, высокий уровень заразности наблюдается у больных при первичном и вторичном сифилисе, который проявляется формированием на кожном покрове и слизистых половых органов первых проявлений болезни. Именно в данный период времени происходит интенсивное размножение и выделение в окружающее пространство бледной трепонемы.

В наше время растет количество больных, у которых сифилис проявляется экстрагенитальными шанкрами, которые локализуются на слизистой оболочке рта, глотки, ануса. Элементы сыпи могут наблюдаться на лице, а сифилиды на ладонной поверхности рук и подошвах.

Сифилис врожденного генеза, как уже отмечалось, формируется в результате заражения ребенка от больной матери еще во время пребывания в ее утробе. Характеризуется присутствием таких патологических симптомов как: врожденная глухота, кератит, гетчисоновые зубы.

Диагностика

Перед тем, как начать лечить больного, врач для постановки верного диагноза и назначения эффективной терапии проводит осмотр пациента и сбор анамнестических данных, а также назначает проведение:

• Микроскопического и бактериоскопического обследования мазка взятого с поверхности шанкра (материалом является тканевый экссудат) или биопсийного материала лимфатического узла (но только в первый месяц заболевания). Для лучшей информативности мазка поверхности язв и эрозий предварительно смазывают физраствором, проводят забор материала и готовят препарат для микроскопического исследования. Проводится окраска материала по Романовскому-Гимзе, бледная трепонема при этом приобретает розовый оттенок. Необходимо акцентировать внимание на том, что живые бледные трепонемы в неокрашенном мазке не выявляются под световым микроскопом. В таком случае оправданным считается использование темнопольной или фазоконтрасной микроскопии. Трепонема обладает способностью приводить к преломлению лучей света и выглядит как спиралевидная полоска белого цвета.
• Серологических реакций, целью которых является диагностирование антител к возбудителю сифилиса в плазме крови. Чаще всего проводят реакцию Вассермана и реакцию быстрых плазменных реагентов. Данные исследования считаются обязательными и применяются даже при осуществлении медицинского осмотра с профилактической целью в поликлинических медицинских учреждениях.
• Реакции иммунофлюоресценции, гемагглютинации, иммобилизации трепонем. Данные исследования отличаются чрезвычайно высоким уровнем чувствительности и точности. Позволяют выявить в крови человека антитела. Например, IgM свидетельствуют о наличии острого воспалительного процесса, IgG указывают на хроническое течение болезни.
• Иммуноферментного анализа. Этот метод обследования, как и предыдущие, помогает диагностировать наличие антител к бледной трепонеме. После того, как пройдет 14 дней, в плазме крови начинают проявляться IgM и IgA, а через месяц — IgG (особенностью является то, что именно в этот период их количество находится на пике, с течением времени оно уменьшается).
• ПЦР диагностики.

Лечение

При появлении патологических симптомов необходимо обратиться к дерматологу. Лечащий доктор проведет тщательное обследование пациента и назначит индивидуальную схему лечения, которая будет зависеть от тяжести клинических проявлений сифилиса и физиологических особенностей больного. Необходимо заметить, что правильное, полноценное лечение приводит к полному выздоровлению.

Основным направлением лечебной терапии считается уничтожение бледной трепонемы. С этой целью больным назначают антибактериальные препараты в немалых дозах. В большей части случаев применяются препараты из группы:

• пенициллинов — Бензилпенициллин;
• тетрациклинов — Доксациклин;
• макролидов — Кларитромицин или Сумамед;
• цефалоспоринов — Цефазолин;
• фторхинолонов — Ципрофлоксацин.

Важно! Продолжительность приема лекарств должна составлять не менее двух месяцев.

Параллельно с антибиотикотерапией назначают:

• иммуностимуляторы;
• витаминно-минеральные комплексы;
• пробиотики;
• физиотерапевтические процедуры.

Половой партнер больного также в обязательном порядке должен проходить лечение, это позволит предупредить риск повторного заражения. Важным нюансом, который требует особого внимания, считается то, что на период лечения категорически запрещается вести половую жизнь.

Определение эффективности лечения сифилиса считается довольно непростым делом. Объясняется это тем, что практически все клинические проявления болезни исчезают уже при проведении части лечения, но это еще не является подтверждением того, что бледная спирохета погибла. Чтобы узнать вылечился ли больной, необходимо назначить прохождение серологических исследований.

К лечению болезни необходимо относиться со всей ответственностью, ведь она считается асоциальной и может становиться причиной тяжелых осложнений и даже летального исхода.

Меры профилактики

Для того, чтобы предотвратить попадание бледной трепонемы в организм, необходимо:

• С особым вниманием следить за личной гигиеной.
• Пользоваться только своим бельем.
• Использовать индивидуальные косметические средства.
• Избегать случайных половых связей. Если же незащищенные отношения все же произошли, нужно как можно скорее провести обработку половых органов раствором Альбуцида или Хлоргексидина от которых бледная спирохета погибает.
• Пользоваться барьерными средствами контрацепции.

В обязательном порядке профилактическое проводится:

• донорам;
• женщинам в период вынашивания ребенка;
• лицам, профессия которых связана с пищевой промышленностью;
• учителям и воспитателям детских садов;
• медицинским работникам;
• лицам, поступающим на лечение в стационар.

Подведя итог, необходимо отметить, что благодаря развитию фармацевтической отрасли и применению антибактериальной терапии прогноз сифилиса считается благоприятным. Все что необходимо, это лишь пройти правильное лечение и соблюдать все рекомендации врача. Ни в коем случае не занимайтесь самолечением, ведь это может привести к очень плачевным последствиям.

Вот практически и вся информация о том, что такое бледная трепонема и сифилис, и как необходимо лечить данное патологическое состояние. Надеемся, она будет для вас полезной и поможет разобраться с волнующими вопросами.

Учебник состоит из семи частей. Часть первая – «Общая микробиология» – содержит сведения о морфологии и физиологии бактерий. Часть вторая посвящена генетике бактерий. В части третьей – «Микрофлора биосферы» – рассматривается микрофлора окружающей среды, ее роль в круговороте веществ в природе, а также микрофлора человека и ее значение. Часть четвертая – «Учение об инфекции» – посвящена патогенным свойствам микроорганизмов, их роли в инфекционном процессе, а также содержит сведения об антибиотиках и механизмах их действия. Часть пятая – «Учение об иммунитете» – содержит современные представления об иммунитете. В шестой части – «Вирусы и вызываемые ими заболевания» – представлены сведения об основных биологических свойствах вирусов и о тех заболеваниях, которые они вызывают. Часть седьмая – «Частная медицинская микробиология» – содержит сведения о морфологии, физиологии, патогенных свойствах возбудителей многих инфекционных заболеваний, а также о современных методах их диагностики, специфической профилактики и терапии.

Учебник предназначен для студентов, аспирантов и преподавателей высших медицинских учебных заведений, университетов, микробиологов всех специальностей и практических врачей.

5-е издание, исправленное и дополненное

Книга:

Бледная трепонема – возбудитель сифилиса

Сифилис – циклически протекающее венерическое заболевание человека, вызываемое бледной спирохетой; I стадия проявляется твердым шанкром (фр. chancre – язва), II стадия – поражением стенки сосудов и различными сыпями, III – гуммами в различных органах с поражением нервной системы. Гумма (лат. gummi – камедь) – хронический инфильтрат в виде узла, склонный к распаду и изъязвлению. Сифилитическая гумма (син .: сифилитическая гранулема, сифилид гуммозный, сифилома третичная) – безболезненная полушаровидная гумма, являющаяся проявлением третичного активного сифилиса. Возбудитель – Treponema pallidum – был открыт в 1905 г. Ф. Шаудином и Э. Гофманом.

T. pallidum – микроорганизм спиралевидной формы, размерами 0,09 – 0,18 ? 6 – 20 мкм. Число завитков спирали от 8 до 12, завитки равномерны, расположены друг от друга на одинаковом расстоянии около 1 мкм, высота по направлению к концам уменьшается. В электронном микроскопе имеет вид змеи или дождевого червя. На обоих концах трепонемы расположены блефаропласты с прикрепленными к ним жгутиками, число которых варьирует от двух до нескольких, они образуют осевую нить, закрученную вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты. При неблагоприятных условиях может образовывать цисты. В организме животных может возникать мукополисахаридной природы капсулоподобный чехол.

Трепонема плохо окрашивается анилиновыми красителями, в связи с чем возбудитель сифилиса и получил название бледной спирохеты. Восстанавливает нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности микроба и делает его видимым в тканях: при окраске по Морозову трепонемы выглядят коричневыми или почти черными. При окраске по Романовскому – Гимзе приобретают бледно-розовый цвет.

Трепонемы обычно размножаются поперечным делением, при этом разделившиеся клетки могут в течение некоторого времени прилегать друг к другу. Время деления – около 30 ч.

Живые трепонемы очень подвижны, совершают движения вокруг собственной продольной оси, а также сгибательное, волнообразное и поступательное движение.

До настоящего времени пока нет такого метода, при котором бы удавалось стабильно получать культуры трепонем. Патогенные для человека бледные трепонемы никогда не удавалось культивировать на искусственных питательных средах, в куриных эмбрионах или культурах клеток. Те разновидности их штаммов, которые растут в анаэробных условиях, являются, вероятно, сапрофитными спирохетами, близкими к возбудителю сифилиса. Физиология их остается мало изученной. Трепонемы относятся к хемоорганотрофам, не имеют каталазы и оксидазы, могут сбраживать углеводы. Они растут на очень богатых средах, содержащих до 11 аминокислот, витамины, соли, сывороточный альбумин. Наилучшим способом выращивания патогенных спирохет является заражение кролика в яичко (экспериментальный орхит). Высказано предположение о существовании у T. pallidum жизненного цикла, включающего, помимо спиралевидной формы, зернистую стадию и стадию кистоподобных сферических тел. Именно зернистые формы этих микроорганизмов способны проходить через бактериальные фильтры.

Антигены трепонем плохо изучены. Установлено, что в составе трепонем имеются белковые, полисахаридные и липидные комплексы. Антигенный состав культуральных и тканевых трепонем настолько близок, что антигены, приготовленные из культуральных трепонем, можно использовать для РСК при диагностике сифилиса. В организме человека трепонемы стимулируют выработку антител, которые вызывают иммобилизацию и гибель живых подвижных трепонем, связывают комплемент в присутствии суспензии T. pallidum или родственных спирохет, а также выявляются в непрямой РИФ.

Возбудитель сифилиса не образует экзотоксинов. К внешним воздействиям бледные трепонемы относительно малоустойчивы. Быстро погибают при высушивании и при повышенных температурах (при 55 °C в течение 15 мин). В 0,3 – 0,5 % растворе HCl моментально утрачивают свою подвижность; так же быстро утрачивают ее и погибают в присутствии препаратов мышьяка, висмута, ртути. В цельной крови или в сыворотке при 4 °C сохраняют жизнеспособность в течение 24 ч, что следует учитывать при переливании крови.

Эпидемиология. Сифилис – типичное венерическое заболевание. Источник инфекции – больной человек, обычно заразен в течение 3 – 5 лет; больные с поздними формами сифилиса не заразны. Заражение в подавляющем большинстве случаев происходит при различных видах половых и бытовых контактов, редко трансплацентарным путем от больной матери ребенку (врожденный сифилис) или как профессиональное заражение контактным путем у медицинского персонала. В естественных условиях сифилисом болеет только человек, в эксперименте возможно заражение обезьян, хомячков и кроликов. У обезьян в месте введения трепонем развивается твердый шанкр, у кроликов и хомячков инфекция протекает бессимптомно.

Патогенез и клиника. Инкубационный период при приобретенном сифилисе варьирует от 2 до 10 нед., обычно 20 – 28 дней. Входными воротами инфекции чаще всего являются слизистые оболочки половых органов, реже – полости рта, а также поврежденная кожа. В месте внедрения возбудитель размножается, формируется первичная сифилома (твердый шанкр) – эрозия или язва с уплотненным основанием. Далее возбудитель попадает в лимфатическую систему, развивается лимфангоит и регионарный лимфаденит. Это типичная клиника первичного сифилиса, который продолжается 1,5 – 2 мес. Потом эти признаки исчезают. Вторичный период сифилиса связан с генерализацией процесса, когда увеличиваются многие лимфатические узлы, а на коже и слизистых оболочках появляются высыпания; могут наблюдаться поражения внутренних органов и нервной системы. Различают вторичный свежий и вторичный рецидивирующий сифилис. При каждом последующем рецидиве интенсивность сыпи становится все менее выраженной, а периоды между рецидивами увеличиваются. В элементах сыпи содержится большое количество живых трепонем, в этот период больной наиболее заразен. Продолжительность вторичного сифилиса – до 4 лет и более. Далее болезнь вступает в длительный бессимптомный период, по прошествии которого, через несколько лет, развивается третичный сифилис. При этом наблюдаются грубые органические поражения внутренних органов, сердечно-сосудистой системы, ЦНС, костей, формируются гуммы, сопровождающиеся распадом ткани и дегенеративными изменениями. Характерной клинической особенностью сифилиса является отсутствие каких-либо субъективных жалоб со стороны больного (боль, зуд, жжение и т. д.).

Иммунитет. Против сифилиса ни естественного, ни искусственного иммунитета не возникает; есть только инфекционный иммунитет, и пока он существует, человек практически не восприимчив к новому заражению. Инфекционный иммунитет развивается через 10 – 11 дней после появления твердого шанкра (шанкерный иммунитет), в этот период повторное заражение или не наблюдается, или новый образовавшийся шанкр протекает абортивно (суперинфекция). В дальнейшем при суперинфицировании характер возникающих поражений соответствует стадии болезни в момент повторного заражения. Суперинфекция объясняется временным ослаблением или «срывом» инфекционного иммунитета. От суперинфекции необходимо отличать реинфекцию, т. е. новое, повторное заражение человека, ранее болевшего сифилисом (излечившегося) и, следовательно, утратившего инфекционный иммунитет. Описаны случаи даже трехкратного заболевания сифилисом. Инкубационный период у таких больных короче, чаще развиваются множественные язвенные шанкры с лимфаденитом, серологические реакции становятся положительными раньше. Во вторичном периоде папулы на коже нередко эрозируются. Это объясняется тем, что при сифилисе развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа, после излечения в организме длительно сохраняются сенсибилизированные лимфоциты. Инфекционный иммунитет имеет нестерильный характер и обусловлен гуморальными факторами: в сыворотке больного обнаруживаются иммуноглобулины классов G, A и М.

Лабораторная диагностика. Для диагностики сифилиса оптимален комплексный подход, предполагающий одновременное использование нескольких методов. Их традиционно подразделяют на прямые, позволяющие доказать наличие возбудителя в исследуемом материале (заражение животных, различные виды микроскопии и молекулярно-генетические методы детекции ДНК T. pallidum – ПЦР и ДНК-зондирование), и непрямые – серологические тесты для выявления антител. В свою очередь, серологические тесты представлены нетрепонемными и трепонемными.

Исследуемым материалом для обнаружения трепонем в прямых методах является отделяемое твердого шанкра или его пунктат, пунктат лимфатического узла, соскоб из розеолы, ликвор. Лучше всего в нативном материале возбудитель выявляется темнопольной (см. рис. 111.4) или фазово-контрастной микроскопией, что позволяет наблюдать разные типы движения живого возбудителя. Если уже начато лечение антибиотиками, возбудителя в патологическом материале обнаружить невозможно. При необходимости проводят прямую (или непрямую) РИФ или окрашивают препарат по Романовскому – Гимзе. Эти методы используют только для ранней диагностики сифилиса.

Серологические тесты можно использовать на различных стадиях заболевания, кроме серонегативного первичного сифилиса. Обычно применяют комплекс серологических реакций. К нетрепонемным тестам с визуальным определением результатов относятся: реакция связывания комплемента (реакция Вассермана = РСКк = RW) с кардиолипиновым антигеном сердечной мышцы быка (перекрестно реагирующий антиген), реакция микропреципитации (МР, или РМП) – микрореакция с плазмой и инактивированной сывороткой; RPR – тест быстрых плазменных реагинов, и другие реакции. Специалисты считают, что для массового обследования лучше всего применять два теста: RPR и РПГА или ИФА, так как RPR более чувствителен при первичном сифилисе, РПГА – на более поздних стадиях заболевания, а ИФА – на всех стадиях. К нетрепонемным тестам с микроскопическим считыванием результатов относятся VDRL-тест и USR-тест. Нетрепонемные тесты используют в качестве отборочных (скрининговых), так как они могут давать ложноположительные результаты. В трепонемных тестах используют антигены трепонемного происхождения. Их применяют для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (ложноположительны?) при клиническом, эпидемиологическом и анамнестическом подозрении на сифилис, для диагностики скрытых и поздних форм, для ретроспективного диагноза. К трепонемным тестам относят: РСКт (РСК с трепонемным антигеном), РИБТ (или РИТ) – реакция иммобилизации бледных трепонем, РИФ (одна из лучших реакций), РПГА, ИФА, иммуноблотинг.

Специфическая профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. Неспецифическая профилактика предусматривает воздержание от случайных половых связей, раннее выявление больных, особенно со скрытой формой заболевания, и их своевременное и эффективное лечение. Для лечения сифилиса используют антибиотики: пенициллин и его производные (водорастворимые и дюрантные формы), иногда эритромицин. Используют также препараты висмута, мышьяка, ртути.

Treponema pallidum - возбудитель сифилиса включен в род Treponema (от лат. trepo - поворачивать, nemo - нить).

Т. pallidum открыта Ф. Шаудином в 1905 г. Большой вклад в изучение сифилиса внесли И. И. Мечников, П. Эрлих, Д. К. Заболотный и др.

Морфология . Т. pallidum - спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Трепонемы подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет, поэтому они называются Т. pallidum - бледная трепонема. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии - в темном поле.

Возбудители сифилиса спор и капсул не имеют (см. рис. 4).

Культивирование . Бледные трепонемы очень требовательны к питательным средам. На искусственных питательных средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность.

Ферментативными свойствами трепонемы не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород.

Токсинообразование . Не установлено.

Антигенная структура . Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.

Устойчивость к факторам окружающей среды . Бледные трепонемы малоустойчивы. Температура 45-55° С губит их через 15 мин. К низким температурам они устойчивы. При замораживании сохраняются до года. Спирохеты чувствительны к солям тяжелых металлов (ртути, висмута, мышьяка и др.). Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их в течение нескольких минут. Они чувствительны к бензилпенициллину, бициллину и др. Под влиянием некоторых факторов внешней среды и антибактериальных препаратов трепонемы могут образовывать цисты. В такой форме они длительно находятся в организме в латентном состоянии.

Восприимчивость животных . В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Однако на обезьянах, как показали И. И. Мечников и Э. Ру, можно воспроизвести клиническую картину сифилиса: на месте введения образуется твердый шанкр. В настоящее время показано, что при заражении кроликов, морских свинок на месте введения или в другом месте на коже образуются язвы. На кроликах путем пассажей можно длительное время сохранять выделенный штамм трепонем.

Источники инфекции . Больной человек.

Пути передачи . Контакт бытовой (прямой контакт), преимущественно половой путь. Иногда сифилис может передаваться через предметы (посуду, белье). От больной сифилисом матери заболевание передается через плаценту ребенку (врожденный сифилис).

Патогенез . Входными воротами являются слизистые оболочки половых путей и ротовой полости.

Первичный период - спирохеты попадают на слизистую оболочку, и после инкубационного периода (в среднем 3 нед) на месте внедрения образуется язва, которая характеризуется плотными краями и дном - твердый шанкр. Образованию твердого шанкра сопутствует увеличение лимфатических узлов. Первичный период продолжается 6-7 нед.

Вторичный период - возбудители сифилиса по лимфатическим и кровеносным путям распространяются по всему организму. При этом на коже и слизистых оболочках образуются розеолы, папулы, везикулы. Продолжительность этого периода - 3-4 года.

Третий период - развивается при нелеченом сифилисе. В этот период в органах, тканях, костях, сосудах образуются грануляционные разрастания - гуммы или гуммозные инфильтраты, склонные к распаду. Этот период может продолжаться несколько лет (в скрытой форме). Больной в этот период незаразен. При нелеченом сифилисе (в некоторых случаях), спустя много лет, может наступить поражение центральной нервной системы: при поражении головного мозга - прогрессивный паралич, при поражении спинного мозга - спинная сухотка. Эти заболевания возникают при локализации трепонем в мозговой ткани, что приводит к тяжелым органическим и функциональным изменениям в организме.

Иммунитет . Естественного иммунитета нет. При заболевании сифилисом развивается "нестерильный" инфекционный иммунитет. Его называют шанкерный, так как при повторном заражении твердый шанкр не образуется, но все последующие периоды развиваются. При сифилисе обнаруживают IgC и IgM, а также реагины IgE, которые в присутствии кардиолипидного антигена связывают комплемент.

Профилактика . Санитарно-просветительная работа, раннее выявление больных сифилисом. Специфическая профилактика. Не разработана.

Лечение . Пенициллин, бициллин, биохинол и др.

Контрольные вопросы

1. Опишите морфологию спирохет и методы окраски.

2. Что такое твердый шанкр?

3. Какой материал для исследования Вы будете брать в разные периоды заболевания сифилисом?

4. Каков иммунитет при сифилисе?

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выявление бледной трепонемы и серодиагностика.

Материал для исследования

1. Содержимое твердого шанкра (первичный период).

2. Содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период).

3. Кровь (вторичный, третий и четвертый периоды).

Основные методы исследования

1. Микроскопический.

2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

3. Серологический: 1) реакция Вассермана (РСК);

2) осадочные реакции.

4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ).

Серологическая диагностика

Реакция Вассермана . Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента (табл. 52). Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца - кардиоантиген. Ввиду неспецифичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положительная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.

Примечание. 1) ++++ полная задержка гемолиза; - гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепонем.

Осадочные реакции . 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56° С 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции (табл. 53).

Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция .

2. Реакция Закса - Витебского (цитохолевая осадочная реакция) является модификацией реакции Кана. Авторы применили более концентрированный антиген, к которому прибавлен холестерин, что способствует более быстрому образованию преципитата.

Реакция иммобилизации трепонем (РИТ) . Это наиболее специфичная реакция в диагностике сифилиса.

В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичка кролика, зараженного Т. pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. В пробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добавляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.

Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-ю - наливают инактивированную сыворотку морской свинки. Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат, заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19 объемов азота) и ставят в термостат при 35° С. Затем исследуемый материал наносят на стекло и изучают подвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованных трепонем.

Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным - от 30-50%; отрицательным - ниже 20%.

Контрольные вопросы

1. Какой материал используют для лабораторной диагностики сифилиса в разные периоды заболевания?

2. Каковы методы лабораторного исследования при диагностике сифилиса?

3. Какими антигенами нужно пользоваться при постановке реакции Вассермана?

4. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции иммобилизации трепонем (РИТ)? Какой материал берут у обследуемого, что в нем определяют?

У больных с подозрением на сифилис исследованию на бледную трепонему подлежат все высыпания, особен но эрозивные и язвенные на коже и слизистых оболочках полости рта, половых органов и заднего прохода. Если ис следование высыпных элементов невозможно или за труднено, то прибегают к пункции лимфатических узлов.

Бледная трепонема располагается в тканевых щелях, между волокнами соединительной ткани, вокруг лимфатических и кровеносных сосудов, в стенках и даже про светах лимфатических капилляров. Материалом, который необходим для бактериологического исследования на бледную трепонему, является тканевая жидкость (се рум). Для получения тканевой жидкости из высыпных элементов сифилиса существует несколько методов.

Перед взятием материала для исследования поверхность эрозивных или язвенных элементов предварительно осторожно очищают ватным или марлевым тампоном, смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия, после чего осушают, не допуская травмирования во избе жание кровотечения.

Через некоторое время на поверхности исследуемого элемента начинает выделяться довольно обильная ткане вая жидкость. Если этого не происходит, то можно осто рожно поглаживать поверхность эрозии или язвы бактериологической петлей или металлической лопаткой. Тканевую жидкость для исследования можно получить также путем сдавливания (массажа) пальцами в резино вой перчатке подозрительной эрозии или язвы, а также путем создания относительного вакуума с помощью би ровской баночки. При отсутствии эрозирования или изъ язвления высыпаний материал для исследования можно получить путем скарификации их поверхности скальпе лем. Если проводилось местное лечение или трепонема не найдена, то следует назначить больному на несколько дней влажновысыхающие повязки из изотонического раствора хлорида натрия и затем производить повторное исследование.

Пункцию лимфатического узла осуществляют у больного в положении лежа с соблюдением всех правил асеп тики. Для пункции используют острую иглу с тупо сре занным концом и шприц с хорошо притертым поршнем. Игла и шприц должны быть сухими. Исследуемый лим фатический узел фиксируют I и II пальцами левой руки, а правой со шприцем и надетой на него иглой делают по слойный прокол кожи и лимфатического узла. Прокол делают по длинной оси узла, продвигают иглу до конца узла, слегка массируя его. Затем медленно выдвигают иглу назад, одновременно отсасывая шприцем содержи мое лимфатического узла. При так называемой «пункции с обогащением» рекомендуется ввести в корковый слой лимфатического узла 0,1–0,2 мл стерильного изотониче ского раствора хлорида натрия, движением поршня шприца промассировать узел и затем отсосать содержи мое. Пунктат лимфатического узла используют для ис следования на бледную трепонему по обычной методике, причем перед исследованием его желательно не смеши вать на предметном стекле с изотоническим раствором хлорида натрия.

Наилучшим методом обнаружения бледных трепонем для диагностики сифилиса является микроскопическое исследование нативных (естественных, влажных) препа ратов в темном поле. Исследование в темном поле основа но на феномене Тиндаля: если в темное помещение про пустить через узкую щель солнечный свет, то начинают ярко светиться мелкие пылинки, невидимые при обыч ном освещении. Это происходит оттого, что находящиеся в воздухе пылинки отражают солнечные лучи в разных направлениях и часть этих лучей попадает в наш глаз. При микроскопическом исследовании в темном поле ис пользуется специальный конденсор, направляющий лучи света от осветителя под очень малым углом к плоскости столика микроскопа, вследствие чего свет не попадает в окуляр микроскопа, и поле зрения является темным. Ис следуемый объект отражает свет и становится четко ви димым на темном фоне. Исследование в темном поле микроскопа позволяет изучать бледную трепонему в жи вом виде, а также дифференцировать ее от других трепо нем как по морфологическим признакам, так и по харак терным особенностям движения.

Для получения затемненного поля зрения при отсутствии специального конденсора можно пользоваться спосо бом М. П. Архангельского. Для этого между двумя линза ми конденсора Аббе на нижнюю линзу накладывают кружок из плотной черной бумаги с таким расчетом, что бы по краю линзы оставался просвет в 2–3 мм. Для того, чтобы кружок не смещался, по его краю оставляют при вырезании четыре выступа такой длины, чтобы они упи рались в металлическую оправу линзы.

Приготовление препарата для исследования в затемненном поле зрения производится следующим образом. Каплю серозного экссудата, полученного с поверхности исследуемого элемента, помещают в центре тонкого пред метного стекла, предварительно обезжиренного смесью равных частей спирта и эфира. Для исследования в темном поле предметные стекла должны быть не толще

1,1–1,2 мм, без царапин, совершенно чистыми. Капля с исследуемым материалом не должна выходить за преде лы покровного стекла. Рядом с каплей серозного экссуда та наносят равную по величине каплю изотонического раствора хлорида натрия; быстро смешав обе капли, по крывают их покровным стеклом.

В некоторых лабораториях, однако, с успехом микроскопируют только серозный экссудат без добавления изо тонического раствора. На верхнюю линзу темнопольного конденсора наносят каплю иммерсионного масла или дистиллированной воды, к которой прижимают приго товленный препарат. Микроскопию проводят с объекти вом 40 и окуляром 10 или 5.

Источник света устанавливают так, чтобы световой луч падал на зеркало микроскопа.

После того как препарат помещен на столик микроско па и установлен источник света, тубус микроскопа с объ ективом под контролем глаза осторожно опускают почти до покровного стекла. Затем поворотами зеркала добива ются наиболее яркого освещения поля зрения и после этого, не отрывая глаза от окуляра, очень осторожно под нимают тубус микроскопа до тех пор, пока не появится темное поле со светящимися в нем твердыми частицами, находящимися в броуновском движении. Среди них мо гут обнаруживаться отдельные нейтрофилы, лимфоциты, эпителиальные клетки. Если препарат сильно загрязнен этими элементами, то лучше приготовить новый препа рат. Бледная трепонема в темном поле зрения представ ляется в виде нежной спирали или тонкого нежного пунк тира. Она слабо преломляет свет и имеет серебристый оттенок. Важное значение имеет оценка характерных для бледной трепонемы движений. При микроскопии не сле дует смешивать с трепонемой нити фибрина - длинные

(с большими завитками) образования, производящие впечатление подвижных за счет тока жидкости. Большей частью они очень тонки и неравномерны по толщине.

Бледную трепонему следует дифференцировать от других трепонем, прежде всего встречающихся на поло вых органах и в полости рта. На половых органах необхо димо иметь в виду T. refringens. Она значительно толще бледной трепонемы, сильнее преломляет свет, имеет не многочисленные неравномерные, грубые, широкие, более покатые и менее глубокие завитки. Концы ее заострены, движения резкие, беспорядочные. Также следует отли чать от бледной трепонемы T. balanitidis, похожую на T. refringens, отличающуюся значительной длиной, тол щиной и имеющую 6–10 завитков.

При исследовании материала, взятого из полости рта, необходимо учитывать наличие здесь следующих трепонем:

1) T. microdentium (T. denticola) - она короче и, как правило, толще бледной трепонемы, завитки ее не сколько заострены, угловаты, она сильнее прелом ляет свет, выглядит ярче, перемещается медленнее, сгибательные движения редки;

2) T. buccalis обладает 3–10 широкими, плоскими, не равномерными завитками, сильно преломляет свет, оживленно движется, концы ее тупые;

3) T. vincenti (из фузоспириллезного симбиоза) пред ставляет собой тонкую и нежную трепонему с пло скими и неравномерными завитками, иногда имею щую 2–3 пологих завитка; движения ее активны, но беспорядочны, она светится ярче бледной трепоне мы.

Бледные трепонемы плохо окрашиваются анилино выми красителями, но восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности трепонем и делает их видимыми при микро скопии. На этом феномене основано обнаружение блед ных трепонем в тканях.

Метод Levaditi и Manouelian. Кусочки кожи или других органов, толщиной 1–2 мм фиксируют в 10% форма лине в течение 24–48 ч, промываются 96% этанолом в те чение 12–16 ч, затем промывают дистиллированной водой до погружения кусочков на дно сосуда. После этого проводится импрегнация 1% раствором нитрата серебра с

10% раствором пиридина. Кусочки выдерживают в этой смеси (в темной банке с притертой пробкой) 2–3 ч при комнатной температуре, а затем 4–6 ч при температуре

50 °С в термостате. Затем препараты быстро промывают в 10% растворе пиридина, после чего в течение нескольких часов проводится восстановление серебра 4% пиррогало вой кислотой с добавлением 10% очищенного ацетона и

15% раствора пиридина.

Метод Морозова - один из наиболее быстрых мето дов серебрения бледных трепонем, дающих вполне удов летворительные результаты [Овчинников Н.М. и др.,

1987]. Для окраски по методу Морозова необходимы следующие реактивы:

Реактив № 1 - 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл 40% раствора формалина и 100 мл дистиллированной воды;

Реактив № 2 - 5 г танина, 100 мл жидкой карболовой кислоты и 100 мл дистиллированной воды;

Реактив № 3 - раствор нитрата серебра (в 100 мл дис тиллированной воды растворяют 5 г кристаллического нитрата серебра; из этого количества в отдельный сосуд отливают 20 мл; к остальным 80 мл раствора нитрата се ребра по каплям прибавляют крепкий водный раствор аммиака, пока образующийся желто коричневый, а за тем буро черный осадок не растворится и не останется лишь легкая опалесценция; если добавление аммиака вовремя не прекращено, то из оставшихся 20 мл раство ра нитрата серебра приливают по каплям этот раствор до появления легкой опалесценции), для окраски реак тив разбавляют дистиллированной водой 1:10.

Импрегнация. Тонкий препарат высушивают на воздухе, но лучше в термостате. На 1 мин наливают на препарат реактив

№ 1, затем жидкость сливают, препарат обмывают водой. Протравливают реактивом № 2 при подогревании до появле ния паров (1 мин). Тщательно промывают водой, наливают реактив № 3, слегка подогревают в течение 1–2 мин, пока ре актив не станет темно коричневым. Препарат вновь тщатель но промывают водой и высушивают. Микроскопируют с им мерсионной системой.

При этом методе импрегнации трепонемы коричневые или почти черные, у них сохраняются морфологические особенности.

Препараты не подлежат длительному хранению.

Окраска по Романовскому - Гимзе. Фиксацию мазка осуществляют в смеси Никифорова (этанол и эфир в рав ных объемах). После испарения с мазка фиксирующей жидкости производят окраску препарата краской Рома новского - Гимзы, разведенной из расчета 2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды. Для этого 10–15 мл раз веденной краски наливают в чашку Петри, на две стек лянные палочки мазком вниз опускают предметное стек ло и оставляют препарат для окрашивания на 2–5 ч, в зависимости от интенсивности окрашивающей способ ности раствора. После окончания окрашивания предмет ное стекло с мазком осторожно промывают боковой струей воды. Высушивают препарат при комнатной температу ре. Микроскопическое исследование проводят в иммер сионной системе. При окраске препаратов по методу Ро мановского - Гимзы бледная трепонема приобретает розовый или розовато фиолетовый цвет, в то время как другие трепонемы окрашиваются в интенсивно синева тые тона.