Čo je Png v medicíne. Anémia, patológia hemostázy, onkohematológia

Catad_tema Choroby krvi - články

ICD 10: D61.1, D61.2, D61.3, D61.8, D61.9

Rok schválenia (frekvencia revízií): 2014 (kontrola každé 2 roky)

ID: 121 KR

Profesionálne asociácie:

• Národná hematologická spoločnosť

Schválené

Ruská spoločnosť hematológov

Dohodnuté

Vedecká rada Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie __ __________ 201_

Kritériá kvality

Úroveň dôkazov

Diagnostické opatrenia

Dokončite pokročilý klinický krvný test

Boli uskutočnené morfologické a cytochemické štúdie preparátu kostnej drene

Uskutočnila sa cytogenetická štúdia buniek kostnej drene

Bola vykonaná morfologická (histologická) štúdia preparátu kostnej drene

Röntgen hrudníka a/alebo počítačová tomografia hrudníka a mozgu

Kritériá kvality udalosti (sémantické, obsahové, procesné).

Uskutočnila sa morfologická a/alebo histologická a/alebo štandardná cytogenetická štúdia preparátu kostnej drene

Vykonávaná kombinovaná imunosupresívna liečba (pri absencii kontraindikácií)

Súrodenecká typizácia HLA dokončená

Konzultácia v transplantačnom centre bola vykonaná do 3 mesiacov od okamihu zistenia refraktérneho priebehu

Dočasné kritériá hodnotenia kvality

Imunosupresívna liečba bola vykonaná do 1 mesiaca po histologickom a/alebo cytogenetickom potvrdení diagnózy (pri absencii zdravotných kontraindikácií)

Klinické a hematologické parametre sa hodnotili počas liečby najmenej 2-krát týždenne, kým sa nedosiahla úplná hematologická odpoveď.

Bola vykonaná morfologická štúdia preparátu kostnej drene s hodnotením hematopoézy kostnej drene po ukončení terapeutického programu

Uskutočnila sa štandardná cytogenetická štúdia preparátu kostnej drene (štúdia najmenej 20 metafáz) a/alebo štúdia kostnej drene metódou fluorescenčnej hybridizácie (v prípade neinformatívnej cytogenetickej štúdie na zistenie anomálií charakteristických pre myelodysplastický syndróm)

Vysoko citlivou prietokovou cytometriou každých 6-12 mesiacov bol stanovený klon paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie a boli hodnotené klinické a laboratórne príznaky hemolýzy.

Pred ďalším štádiom liečby bolo vykonané morfologické a/alebo histologické a/alebo štandardné cytogenetické vyšetrenie

Uskutočnil sa druhý cyklus antitymocytového globulínu, stanovenie typizácie HLA (s cieľom určiť prítomnosť darcov alogénnej kostnej drene, pri absencii odpovede po 3-6 mesiacoch)

Bibliografia

1. Kokhno A.V., Pimenova M.A., Parovichnikova E.N., Domračeva E.V. S.V.G. Identifikácia skrytých karyotypových anomálií pri myelodysplastickom syndróme. / S. V. G. Kokhno A. V., Pimenova M. A., Parovichnikova E. N., Domračeva E. V. // Hematológia a transfuziológia - 2014. - V. 59 - č.1 - 25-28s.

1. Kulagin A.D. Aplastická anémia / Kulagin A.D. / vyd. K.V.A. Lisukov I.A. - - Novosibirsk: Nauka, 2008. Vydanie. Veda.
2. Michailova E.A. Protokol pre programovú liečbu pacientov s aplastickou anémiou: kombinovaná imunosupresívna liečba / ed. V.G.Savčenko. Moskva: Prax, 2012. - 135-150.
3. Príjemný M.G. Klonálna evolúcia pri aplastickej anémii. / M. G. Afable, R. V Tiu, J. P. Maciejewski // Hematology Am. soc. Hematol. Vychovávať. Program - 2011. - T. 2011 - 90-5s.
4. Bacigalupo A. Liečebné stratégie pre pacientov s ťažkou aplastickou anémiou. / A. Bacigalupo // Transplantácia kostnej drene. - 2008. - T. 42 Suppl 1 - No. SUPPL.1 - S42-S44s.
5. Borowitz M.J. Pokyny pre diagnostiku a monitorovanie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie a súvisiacich porúch prietokovou cytometriou. / M. J. Borowitz, F. E. Craig, J. A. Digiuseppe, A. J. Illingworth, W. Rosse, D. R. Sutherland, C. T. Wittwer, S. J. Richards // Cytometria B. Clin. Cytom. - 2010. - T. 78 - č. 4 - 211-30s.
6. Kulagin A. Prognostická hodnota prítomnosti klonu paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie u pacientov s aplastickou anémiou liečených kombinovanou imunosupresiou: Výsledky dvojcentrickej prospektívnej štúdie / A. Kulagin, I. Lisukov, M. Ivanova, I. Golubovskaya, I. Kruchkova, S. Bondarenko, V. Vavilov, N. Stancheva, E. Babenko, A. Sipol, N. Pronkina, V. Kozlov, B. Afanasyev // Br. J. Haematol. - 2014. - T. 164 - č. 4 - 546-554s.
7. Marsh J.C.W. Pokyny pre diagnostiku a manažment aplastickej anémie / J. C. W. Marsh, S. E. Ball, J. Cavenagh, P. Darbyshire, I. Dokal, E. C. Gordon-Smith, J. Keidan, A. Laurie, A. Martin, J. Mercieca, S. B. Killick, R. Stewart, J. A. L. Yin // Br. J. Haematol. - 2009. - T. 147 - č.1 - 43-70s.
8. Marsh J.C.W. Pokyny pre diagnostiku a manažment aplastickej anémie. / J. C. W. Marsh, S. E. Ball, J. Cavenagh, P. Darbyshire, I. Dokal, E. C. Gordon-Smith, J. Keidan, A. Laurie, A. Martin, J. Mercieca, S. B. Killick, R. Stewart, J. A. L. Yin / /Br. J. Haematol. - 2009. - T. 147 - č.1 - 43-70s.
9. Marsh J.C.W. Manažment pacienta s refraktérnou aplastickou anémiou: aké sú možnosti? J. C. W. Marsh, A. G. Kulasekararaj - 2014. - T. 122 - 3561-3567s.
10. Scheinberg P. Konský antitymocytový globulín ako záchranná terapia po králičom antitymocytovom globulíne pri ťažkej aplastickej anémii / P. Scheinberg, D. Townsley, B. Dumitriu, P. Scheinberg, B. Weinstein, O. Rios, C. O. Wu, N. S. Young // Am . J. Hematol. - 2014. - T. 89 - č. 5 - 467-469s.
11. Scheinberg P. Ako liečim získanú aplastickú anémiu. / P. Scheinberg, N. S. Young // Krv - 2012. - T. 120 - č. 6 - 1185-96s.
12. Mladý N.S. Epidemiológia aplastickej anémie // Zlyhanie kostnej drene. Syndr. - 1–46 s.
13. Mladý N.S. Problém klonality pri aplastickej anémii: hádanka doktora Damesheka, preformulovaná // Krv. - 1992. - T. 79. - Číslo 6. - 1385-1392s.
14. Mladý N.S. Patofyziologické mechanizmy pri získanej aplastickej anémii. // Hematológia Am. soc. Hematol. Vychovávať. program. - 2006. - 72–77 rokov.
15. Mladý N.S. Vzťah aplastickej anémie a PNH. // Int. J. Hematol. - 2002. - T. 76 Suppl 2. - 168-172s.
16. Zeng Y. Komplexná patofyziológia získanej aplastickej anémie. / Y. Zeng, E. Katsanis // Clin. Exp. Immunol. - 2015. - T. 180 - č. 3 - 361-70s.
17. Vinogradova M.A. Infekčné komplikácie u pacientov s aplastickou anémiou / Vinogradova M.A. - Moskva: dizertačná práca na získanie titulu kandidát lekárskych vied / Štátna inštitúcia "Hematologické výskumné centrum Ruskej akadémie lekárskych vied", 2009.

Príloha A1. Zloženie pracovnej skupiny

Voitsekhovsky V.V. lekár, Blagoveščensk

Vopilina N.A. GBUZ „Tambovská oblastná klinická nemocnica pomenovaná po I.I. V.D.Babenko, Tambov

Gaponova T.V. Kandidát lekárskych vied, zástupca generálneho riaditeľa Federálnej štátnej rozpočtovej inštitúcie Centrum pre výskum hematológie Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva

Golubeva M.E. "Mestské hematologické centrum" pri MBUZ "GKP č. 5", Perm

Kaporskaya T.S. Kandidát lekárskych vied, vedúci oddelenia hematológie Irkutského štátneho rozpočtového zdravotníckeho ústavu, Rád čestného odznaku, Regionálna klinická nemocnica, Irkutsk,

Klyasova G.A. Doktor lekárskych vied, profesor, vedúci vedeckého a klinického laboratória mikrobiológie, Centrum hematologického výskumu federálneho štátneho rozpočtu Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Konštantínová T.S. Prednosta oddelenia hematológie, Regionálne hematologické centrum Regionálnej klinickej nemocnice Sverdlovsk č. 1, Jekaterinburg,

Kulagin A.D. Doktor lekárskych vied, zástupca hlavného lekára pre kliniku Štátnej lekárskej univerzity v Petrohrade. akad. I.P. Pavlova“ Ministerstva zdravotníctva Ruska, Petrohradský výskumný ústav detskej hematológie a transplantológie pomenovaný po. R. M. Gorbačova,

Lapin V.A. Kandidát lekárskych vied, vedúci oddelenia hematológie, Regionálna klinická nemocnica, Jaroslavľ

Michailova E.A. Doktor lekárskych vied, profesor, vedúci výskumník, Katedra chemoterapie hemoblastóz a hematopoetických depresií, Centrum hematologického výskumu federálneho štátneho rozpočtu Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Parovičniková E.N. doktor lekárskych vied, vedúci vedeckého a klinického oddelenia chemoterapie hemoblastóz, hemopoetických depresií a transplantácií kostnej drene, Centrum hematologického výskumu federálneho štátneho rozpočtu Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Ploskikh M.A. GBUZ PC "Permská regionálna klinická nemocnica", Perm

Savčenková V.G. Akademik, doktor lekárskych vied, profesor, generálny riaditeľ Hematologického výskumného centra Federálnej štátnej rozpočtovej inštitúcie Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Samojlová O.S. Kandidát lekárskych vied, vedúci oddelenia hematológie, Oblastná klinická nemocnica Nižný Novgorod v regióne Nižný Novgorod. N.A. Semashko, Nižný Novgorod,

Skripkina N.S. hematológ GAUZ JSC "Amurská regionálna klinická nemocnica", Blagoveščensk,

Tikunova T.S. OGBUZ "Belgorodská oblastná klinická nemocnica sv. Joasafa", Belgorod

Troitskaya V.V. Kandidát lekárskych vied, vedúci vedeckého a klinického oddelenia chemoterapie pre hemoblastózy a hematopoetické depresie, Centrum hematologického výskumu federálneho štátneho rozpočtu Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Ustinova E.N. Kandidát lekárskych vied, výskumný pracovník, Katedra chemoterapie hemoblastóz a hematopoetických depresií, Centrum hematologického výskumu federálneho štátneho rozpočtu Ministerstva zdravotníctva Ruska, Moskva,

Čagorová T.V. GBUZ "Regionálna onkologická ambulancia", Penza

Špecialisti na hematológiu;

onkológovia;

špecializovaní terapeuti;

Metodika zberu dôkazov

Metódy používané na zber/výber dôkazov: vyhľadávanie v elektronickej databáze.

Opis metód používaných na zber/výber dôkazov: dôkazovou základňou pre odporúčania sú publikácie zahrnuté v Cochrane Library, databázach EMBASE a MEDLINE. Hĺbka hľadania bola 10 rokov.

Metódy používané na hodnotenie kvality a sily dôkazov:

Odborný konsenzus;

Metódy používané na analýzu dôkazov:

Systematické prehľady s tabuľkami dôkazov.

Opis metód používaných na analýzu dôkazov:

Pri výbere publikácií ako potenciálnych zdrojov dôkazov sa prehodnocuje metodika použitá v každej štúdii, aby sa zabezpečila jej platnosť. Výsledok štúdie ovplyvňuje úroveň dôkazov priradených k publikácii, čo následne ovplyvňuje silu odporúčaní, ktoré z nej vyplývajú.

Metodologická štúdia je založená na niekoľkých kľúčových otázkach, ktoré sa zameriavajú na tie vlastnosti dizajnu štúdie, ktoré majú významný vplyv na validitu výsledkov a záverov.

Subjektívny faktor môže nepochybne ovplyvniť aj proces hodnotenia. Pre minimalizáciu potenciálnych chýb bola každá štúdia hodnotená samostatne, tzn. najmenej dvaja nezávislí členovia pracovnej skupiny. Akékoľvek rozdiely v hodnotení už boli prediskutované celou skupinou. Ak nebolo možné dosiahnuť konsenzus, zapojil sa nezávislý odborník.

Evidenčné tabuľky:

evidenčné tabuľky vyplnili členovia pracovnej skupiny.

Metódy používané na formulovanie odporúčaní:

odborný konsenzus.

Indikátory dobrej praxe (Dobré Рastic Points - GРРs):

Ekonomická analýza:

Nebola vykonaná analýza nákladov a neboli analyzované publikácie o farmakoekonomike.

externé partnerské hodnotenie;

Interné partnerské hodnotenie.

Tieto návrhy odporúčaní boli posúdené nezávislými odborníkmi, ktorí boli požiadaní, aby sa vyjadrili predovšetkým k rozsahu, v akom je interpretácia dôkazov, na ktorých sú odporúčania založené, zrozumiteľná.

Pripomienky lekárov prvého kontaktu a obvodných terapeutov sa týkali zrozumiteľnosti prezentácie odporúčaní a ich hodnotenia významu odporúčaní ako pracovného nástroja pre každodennú prax.

Návrh bol zaslaný aj nelekárskemu hodnotiteľovi na pripomienkovanie z pohľadu pacienta.

Materiály sú prezentované z vysokoškolskej učebnice RUDN

anémia. Klinika, diagnostika a liečba / Stuklov N.I., Alpidovsky V.K., Ogurtsov P.P. - M .: LLC "Lekárska informačná agentúra", 2013. - 264 s.

Kopírovanie a kopírovanie materiálov bez uvedenia autorov je zakázané a trestné podľa zákona.

Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria (PNH) je získaná klonálna hemolytická anémia spojená s defektom membrány krviniek, preto sa toto ochorenie zaraďuje do skupiny membránopatií a je jedinou získanou membranopatiou spomedzi ochorení tejto skupiny. Mutácia vedúca k defektu membrány v PNH sa vyskytuje na úrovni pluripotentnej kmeňovej bunky a príčina mutácie zostáva nejasná.

PNH sa vyskytuje s frekvenciou 1:500 000 populácie. Ľudia všetkých vekových skupín ochorejú, ale častejšie - vo veku 30 - 40 rokov. Muži a ženy ochorejú rovnako často.

Etiológia a patogenéza

Bodová mutácia génu PIGA na chromozóme 22 alebo X chromozóme pluripotentnej kmeňovej bunky (PSC) vedie k narušeniu tvorby kyseliny fosfatidylinolínovej a proteínov na povrchu krviniek CD 55 a CD 59, ktoré tvoria v normálnych bunkách systém, ktorý blokuje škodlivý účinok aktivovaného komplementu na membránu v dôsledku tvorby kaskády CD 5b -9 - komplex, ktorý má proteolytický účinok na bunkovú membránu.

Absencia faktorov na povrchu krvných buniek, ktoré bránia funkcii komplementu, teda vedie k lýze defektných erytrocytov, neutrofilov a krvných doštičiek.

Pri PNH sú v krvi pacientov dva klony: normálny a patologický, pričom klinický obraz a závažnosť ochorenia do značnej miery závisia od pomeru týchto klonov.

POLIKLINIKA

Proteolytické pôsobenie aktivovaného komplementu vedie k intravaskulárnej deštrukcii defektných erytrocytov, čo sa prejavuje hemoglobinúria. K aktivácii komplementu dochádza v noci počas spánku v dôsledku posunu pH na kyslú stranu.

Klinicky sa hemolýza počas spánku prejavuje uvoľňovaním čierneho moču počas rannej diurézy, sťažnosťami na malátnosť, závraty a žltnutie skléry. Okrem toho môže hemolýza vyvolať infekčné choroby a určité lieky.

Okrem anemických symptómov spojených s hemolýzou zohráva dôležitú úlohu v PNH ambulancii trombotické komplikácie, spôsobené uvoľňovaním tromboplastínu a množstva aktívnych enzýmov zo zničených buniek.

Jednou z prvých sťažností pacienta je často bolesť brucha, ktorá simuluje rôzne akútne brušné patológie. Bolesť brucha je spojená s trombózou malých mezenterických artérií.

Tromboflebitídasa vyskytuje u 12 % pacientov s PNH a môže prebiehať rôznymi spôsobmi. V jednej z možností je stav pacientov mimo krízy celkom uspokojivý, obsah Hb – približne 80 – 90 g/l. U ostatných pacientov nasledujú ťažké hemolytické krízy jedna po druhej, čo vedie k ťažkej anémii. Často sú sprevádzané trombotickými komplikáciami.

Laboratórne údaje

Počas hemolytickej krízy môže dôjsť k prudkému poklesu hladín hemoglobínu na 20 g / l a menej a paralelnému zníženiu počtu červených krviniek. Počas obdobia remisie sa obsah Hb a erytrocytov pribúda, v ojedinelých prípadoch však dosahuje dolnú hranicu normy. Anémia je vo väčšine prípadov normocytická a normochromická. Pri výraznej strate železa v moči (v dôsledku hemoglobinúrie a hemosiderinúrie) sa však vyvíja hypochrómia erytrocytov. Obsah retikulocytov je zvýšený, ale v oveľa menšej miere ako pri vrodených membranopatiách s podobnou intenzitou hemolýzy. Abnormálne hemoglobíny a zníženie aktivity enzýmov (okrem acetylcholínesterázy) v erytrocytoch s PNH neboli zistené. Osmotická rezistencia erytrocytov sa nemení. Počas inkubácie erytrocytov pacientov s PNH za sterilných podmienok je autohemolýza väčšia ako normálne, ktorá však neklesá po pridaní glukózy.

Počet leukocytov je vo väčšine prípadov znížený v dôsledku neutropénie. Niekedy dochádza k posunu doľava v leukograme.

Počet krvných doštičiek je zvyčajne tiež znížený. Funkcie krvných doštičiek nie sú narušené.

Vyšetrenie kostnej drene odhaľuje erytroidnú hyperpláziu a príznaky nedostatočnosti hematopoézy kostnej drene vo forme narušenia dozrievania červených krviniek a granulocytárnych prvkov, ako aj zníženia počtu megakaryocytov, často s porušením šnurovania. krvných doštičiek. U niektorých pacientov s PNH sa spolu so známkami dyshematopoézy zistí hypoplázia kostnej drene, charakteristická pre aplastickú anémiu.

V prípadoch, keď sa u pacientov s predtým zistenou hematopoetickou apláziou zistia erytrocyty PNH citlivé na komplement a príznaky intravaskulárnej hemolýzy, je diagnostikovaný syndróm PNH, ktorý sa vyvinul na pozadí aplastickej anémie.

Treba si však uvedomiť zriedkavé prípady PNH, ktoré končia aplastickou anémiou v dôsledku vyčerpania krvotvorby kostnej drene ťažkými hemolytickými krízami a inými nepriaznivými účinkami (infekcie, niektoré lieky atď.).

Dôležitým laboratórnym príznakom PNH je hemoglobinúria. Obsah voľného hemoglobínu v plazme v dôsledku intravaskulárnej deštrukcie erytrocytov v PNH sa v závislosti od závažnosti hemolýzy pohybuje od 11 do 280 mg% (pri rýchlosti do 4 mg%).

Obsah bilirubínu zvyčajne nie je prudko zvýšený, najmä v dôsledku nekonjugovanej frakcie. Hladina sérového železa v PNH závisí od fázy ochorenia: pri hemolytických krízach v dôsledku uvoľňovania hemoglobínu železa do plazmy sa pozoruje feritinémia a v období pokojného priebehu v dôsledku straty železa v moču, je pozorovaná hypoferitinémia. Nedostatok železa pri PNH, na rozdiel od anémie z nedostatku železa, je sprevádzaný súčasným znížením celkovej a latentnej kapacity viazania železa, zrejme v dôsledku narušenej syntézy transferínu v pečeni.

Pri štúdiu moču u väčšiny pacientov s PNH sa zistí hemoglobinúria. Pri PNH sa hemoglobín objavuje v moči v relatívne nízkej koncentrácii v plazme, čo súvisí so znížením obsahu plazmatického haptoglobínu. Počas vylučovania hemoglobínu obličkami sa jeho časť reabsorbuje a ukladá v epiteli tubulov vo forme hemosiderínu, ktorý sa potom vylučuje močom. Je zaujímavé, že hemosiderinúria v PNH môže byť zachytená častejšie ako hemoglobinúria, pretože sa tiež vyvíja mimo hemolytickej krízy.

Diagnostikaochorenie je spojené s identifikáciou charakteristického klinického obrazu, laboratórnych príznakov intravaskulárnej hemolýzy (hemoglobinémia (červená farba krvného séra po centrifugácii), pokles haptoglobínu v krvi, mierna nepriama bilirubinémia, zvýšenie LDH, hemoglobinúria, hemosiderinúria). Diagnóza PNH je založená na detekcii komplement-senzitívnych erytrocytov charakteristických pre toto ochorenie. Na tento účel sa používajú Hemov kyslý test a citlivejšie sacharózový test.

Pri určovaní štádia testu Hema sa študované erytrocyty inkubujú v normálnom sére okyslenom na pH 6,4. Za týchto podmienok sú lyzované iba erytrocyty citlivé na komplement. Malo by sa pamätať na to, že pri nízkom obsahu PNH-erytrocytov v krvi pacienta a pri nízkej aktivite komplementu v sére môže Hem test poskytnúť negatívne výsledky.

Citlivejší je sacharózový test, pri ktorom sa študované erytrocyty a malé množstvo normálneho séra umiestnia do izotonického roztoku sacharózy. V podmienkach zníženého napätia v sacharózovom médiu nastáva aktívnejšia fixácia komplementu na povrchu erytrocytov a lýza komplement-senzitívnych PNH erytrocytov.

Dôkazom prítomnosti klonu PNH je detekcia znakov charakteristických pre poškodenie génu PIG A na bunkovej membráne hemolýza. Najspoľahlivejšie je štúdium monocytových granulocytov, pretože jadrové bunky sú menej náchylné na pôsobenie komplementu.

Liečba

Vzhľadom na nedostatok jasných predstáv o patogenéze PNH je liečba tohto ochorenia v súčasnosti symptomatická.

Na boj s anémiou sa používajú náhradné krvné transfúzie, ktorých frekvencia závisí od závažnosti hemolýzy a kompenzačnej aktivity kostnej drene. Treba mať na pamäti, že transfúzia čerstvej plnej krvi u pacientov s PNH je často sprevádzaná zvýšením hemolýzy. Dôvod tejto reakcie je nejasný. Pacienti s PNH lepšie znášajú transfúzie plnej krvi alebo erytrocytovej masy dlhodobo skladovanej (viac ako 7–8 dní) a transfúzie 3–5-krát premytých erytrocytov zbavených leukocytov a trombocytov. Použitie premytých erytrocytov je najlepšou transfuziologickou metódou v liečbe PNH. Keď sa v dôsledku rozvoja izosenzibilizácie objaví aj reakcia na premyté erytrocyty, je nutný individuálny výber darcu podľa nepriamej Coombsovej reakcie (obr. 12).

Významné miesto v liečbe PNH zaujíma prípravky železa a androgénne hormóny. Pri zistení hypochrómie erytrocytov a poklesu sérových hladín železa v pokojnom priebehu ochorenia sa pacientom s PNH odporúča terapia preparátmi železa. Prípravky železa sa majú používať opatrne (iba v malých dávkach peros ), keďže je známa ich schopnosť vyvolať závažné hemolytické krízy u niektorých pacientov s PNH.

Použitie androgénov pri PNH je založené na stimulačnom účinku týchto hormónov na erytropoézu. Vymenovanie Nerabolu alebo jeho analógov v dávke 30-40 mg / deň prispieva k rýchlejšiemu zotaveniu hladín hemoglobínu po hemolytickej epizóde, a tým výrazne znižuje potrebu krvných transfúzií. Obzvlášť účinné je použitie androgénov pri PNH s hematopoetickou hypopláziou.

Taktika liečby trombotických komplikácií závisí od lokalizácie trombózy, jej trvania a stavu koagulačného systému. V prípadoch, keď táto komplikácia ohrozuje život pacienta, je potrebné nasadiť komplexnú trombolytickú a antikoagulačnú liečbu (fibrinolyzín alebo urokináza, kyselina nikotínová, heparín a nepriame antikoagulanciá) podľa všeobecných terapeutických pravidiel a v dostatočnom dávkovaní.

Keďže sa po podaní heparínu vyskytujú správy o zvýšenej hemolýze, toto antikoagulancium sa má používať s veľkou opatrnosťou.

Splenektómia pre PNH nie je indikovaná, pretože pooperačné obdobie je často komplikované trombózou mezenterických ciev. Riziko chirurgického zákroku je prijateľné iba vtedy, ak existujú výrazné príznaky hypersplenizmu: hlboká leukopénia komplikovaná častými infekciami a / alebo trombocytopéniou, sprevádzaná ťažkým hemoragickým syndrómom.

Bol vyvinutý moderný geneticky upravený liek Eculizumab (eculizumab) (Soliris, SOLIRIS®), ktorý je registrovaný FDA (Food and Drug administration) na liečbu detí a dospelých trpiacich PNH. Eculizumab je glykozylovaná humanizovaná monoklonálna protilátka, kappa imunoglobulín (IgG2/4k), ktorá sa viaže na ľudský komplementový proteín C5 a inhibuje aktiváciu komplementom sprostredkovanej bunkovej lýzy. Protilátka pozostáva z konštantných oblastí ľudského imunoglobulínu a komplementárnych deterministických oblastí myšacieho imunoglobulínu zabudovaných vo variabilných oblastiach ľahkého a ťažkého reťazca ľudskej protilátky. Eculizumab obsahuje dva ťažké reťazce po 448 aminokyselín a dva ľahké reťazce po 214 aminokyselinách. Molekulová hmotnosť je 147 870 Da. Eculizumab sa produkuje v kultivovaných bunkách myšieho myelómu NSO a purifikuje sa afinitnou a iónomeničovou chromatografiou. Vo výrobnom procese látky sú zahrnuté aj procesy špecifickej inaktivácie a odstraňovania vírusov.

Eculizumab inhibuje terminálnu aktivitu ľudského komplementu, pričom má vysokú afinitu k svojej C5 zložke. V dôsledku toho je štiepenie zložky C5 na C5a a C5b a tvorba komplexu terminálneho komplementu C5b–9 úplne blokované. Eculizumab teda obnovuje reguláciu aktivity komplementu v krvi a zabraňuje intravaskulárnej hemolýze u pacientov s PNH. Na druhej strane je deficit terminálneho komplementu sprevádzaný zvýšeným výskytom infekcií enkapsulovanými mikroorganizmami, hlavne meningokokových infekcií. Eculizumab zároveň zachováva obsah produktov včasnej aktivácie komplementu nevyhnutných na opsonizáciu mikroorganizmov a elimináciu imunitných komplexov. Vymenovanie lieku Soliris pacientom je sprevádzané rýchlym a stabilným poklesom aktivity terminálneho komplementu. U väčšiny pacientov s PNH je plazmatická koncentrácia ekulizumabu približne 35 μg/ml dostatočná na úplnú inhibíciu intravaskulárnej hemolýzy vyvolanej aktiváciou terminálneho komplementu.

Vzhľadom na jedinečné nové klinické výsledky a otvárajúce sa terapeutické možnosti pre lekárov na zachovanie plnohodnotného života a zdravia pacientov bol Eculizumab zaregistrovaný zrýchleným spôsobom, bez vykonania tretej fázy klinických skúšok – to zachráni veľa životov, detí aj dospelých.

V tejto súvislosti po registrácii v USA vydal Európsky výbor pre lieky kladné stanovisko k urýchlenej registrácii Eculizumabu v Európe, ktorá sa tiež očakáva v blízkej budúcnosti.

Vzhľadom na vysoké náklady na ekulizumab, jeho neschopnosť zamerať sa na príčinu ochorenia a skutočnosť, že sa musí používať po celý život, je najvhodnejší pre rezervnú stratégiu navrhnutú špeciálne pre pacientov s vysokým počtom buniek PNH alebo pre pacientov so sklonom k ​​trombóze, nezávisle od veľkosti klonu PNH.

V súčasnosti je jedinou kuratívnou liečbou PNH alogénna transplantácia kostnej drene.

Kurz a predpoveď

Prognóza závisí od závažnosti priebehu základného ochorenia, horšia u pacientov odkázaných na krvné transfúzie, s ťažkou trombózou. U 10% pacientov sa pozorujú spontánne remisie ochorenia, u iných transformácia na aplastickú anémiu, MDS, u 5% - na akútnu leukémiu. Priemerná dĺžka života je 10-15 rokov.

PNH je chronické a v súčasnosti stále úplne nevyliečiteľné ochorenie. Závažnosť PNH a prognóza do značnej miery závisia od veľkosti populácie erytrocytov citlivých na komplement, kompenzačnej schopnosti kostnej drene a od výskytu komplikácií, najmä žilovej trombózy. Myšlienka ťažkej prognózy PNH sa v posledných rokoch výrazne zmenila v dôsledku zavedenia aktívnej symptomatickej liečby.

Zvýšil sa počet pacientov, ktorí sú v tomto období dlhodobo v stave klinickej a hematologickej kompenzácie a vedú normálny život. Výskyt ťažkých, život ohrozujúcich trombóz sa znížil. U niektorých pacientov časom dochádza k zmierneniu priebehu ochorenia s poklesom podielu erytrocytov citlivých na komplement. V ojedinelých prípadoch sa popisuje úplné vymiznutie patologických erytrocytov, čo poukazuje na zásadnú možnosť vyliečenia choroby.

Majitelia patentu RU 2574968:

Vynález sa týka medicíny, menovite laboratórnej diagnostiky, a môže byť použitý na diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie. Na tento účel sa vzorka testovanej krvi zafarbí monoklonálnymi protilátkami CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Prítomnosť klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi sa hodnotí podľa neprítomnosti ochranného proteínu CD59 na membráne retikulocytov izolovanej bránou CD235a - panerytrocytový marker a CD71 - receptor pre transferín. Na posúdenie klonu PNH medzi retikulocytmi sa zhromaždí najmenej 20 000 udalostí v bráne CD71+, v závislosti od brány CD71+, zostaví sa graf FSC(log) vs SSC(log), na ktorom sa izolujú retikulocyty pomocou ďalšej brány CD71str, čím sa populácia retikulocytov vyčistí od zvyškov a dubletov postupným hradlovaním. V prítomnosti 100 % pozitívnych na CD59 retikulocyty sa posudzuje neprítomnosť klonu PNH a diagnostikuje sa neprítomnosť paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie. Ak sa u pacienta s klinickými príznakmi zistia negatívne CD59-retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je viac ako 1 %, urobí sa diagnostický záver o prítomnosti klonu PNH a odporúča sa dodatočná štúdia na potvrdenie diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie podľa medzinárodného štandardizovaného protokolu. Ak sa zistia CD59-negatívne retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je 0,1-1%, posúdi sa prítomnosť minoritného klonu PNH a odporúča sa po 6 mesiacoch opätovne určiť klon PNH, aby sa zvýšila jeho hodnota a vyvinúť paroxyzmálnu nočnú hemoglobinúriu, a ak sa táto veľkosť potvrdí, klon diagnostikovať subklinickú formu paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie bez klinických príznakov. Použitie multiparametrického hradlovania CD71+ buniek umožňuje vylúčiť z analýzy debris, dublety a nešpecificky viazané monoklonálne protilátky. 1 chorý.

Vynález sa týka medicíny, menovite klinických a laboratórnych diagnostických metód a možno ho použiť na skríningovú diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie (PNH).

Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je zriedkavé ochorenie.

PNH je spôsobený mutáciou v géne PIG-A. V dôsledku toho je narušená syntéza glykozylfosfatidylinozitolovej (GPI) kotvy, ktorá fixuje početné molekuly na membráne krvných buniek (vrátane CD24 na granulocytoch, CD14 na monocytoch, CD59 na erytrocytoch a ich prekurzoroch), ktoré chránia krvinky pred účinky komplementového systému.

Membrána erytrocytov je najviac vystavená napadnutiu komplexnými membránami a v neprítomnosti ochranného proteínu CD59 erytrocyty podliehajú hemolýze.

PNH je charakterizovaná intravaskulárnou hemolýzou, anémiou, hemoglobinúriou, trombotickými komplikáciami, dysfágiou, letargiou, erektilnou dysfunkciou, chronickým zlyhaním obličiek a pľúcnou hypertenziou.

Okrem toho sa PNH klon môže vyskytnúť pri aplastickej anémii, autoimunitnej hemolytickej anémii a myelodysplastickom syndróme. Medián veku nástupu PNH je 30-35 rokov. Výskyt paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie je od 1 do 10:1 milióna ľudí. Mortalita bez liečby pri paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii je asi 35 % do 5 rokov od začiatku ochorenia.

V súčasnosti sa objavili bunkové technológie, ktoré umožnili vyvinúť moderné metódy liečby tejto choroby.

V tejto súvislosti bolo potrebné vytvoriť presné diagnostické metódy, pretože. účinnosť a primeranosť liečby závisí od obsahu informácií, objektivity a dôkazov diagnostických opatrení a úplnosti získaných informácií, ktoré umožňujú posúdiť prítomnosť klonu PNH a objasniť diagnózu.

Známa metóda detekcie PNH pomocou Hemovej metódy na diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie (Abdulkadyrov K.M., Clinical Hematology, Handbook - St. Petersburg: Peter, 2006, s. 82), založená na stimulácii inaktivácie komplementového systému ako tzv. výsledok okyslenia vzorky krvi a precitlivenosť na neho erytrocytov pacientov s paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou. Výsledok testu Hema sa hodnotí vizuálne.

Metóda spočíva v tom, že do krvného séra darcu sa pridá 0,2 normálneho roztoku HCl, porovnateľného so sérom pacienta podľa ABO systému antigénov, jeho pH séra sa zmení na 6,4 a tým sa spôsobí aktivácia komplementu. (pomer séra a kyseliny je 9:1). Potom sa desať objemov okysleného séra zmieša s jedným objemom 50 % suspenzie premytých erytrocytov. Potom urobte vizuálne hodnotenie výslednej suspenzie. Pri paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii dochádza k hemolýze erytrocytov a suspenzia získava červenkastú alebo červenú farbu, zatiaľ čo normálne erytrocyty za rovnakých podmienok nehemolyzujú.

Táto technika však nemá dostatočnú citlivosť na určenie menších klonov PNH: minimálna detekovateľná veľkosť klonu je 4,2 až 5 %. Hemova metóda neposkytuje informáciu o veľkosti klonu.

To všetko znemožňuje hodnotenie klonu PNH v percentách, čo je v prípade zistenia ochorenia pri skríningu východiskom pre následné sledovanie a adekvátnu liečbu.

Okrem toho je technika veľmi pracná a nespĺňa moderné diagnostické požiadavky.

Známy je aj spôsob diagnostiky paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie pomocou sacharózového testu („Problémy hematológie a krvnej transfúzie“, 1972, august, 17(8) 55-7, „Posúdenie sacharózového testu na diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie“. “, Idelson L.I., Benisovich V.I., Savina L.S., Radzhivilovskaya E.G.).

Metóda je založená na zvýšenej citlivosti erytrocytov pacienta s paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou na proteíny komplementového systému, v tomto prípade v dôsledku prídavku sacharózy.

Čerstvé darcovské sérum sa pridáva do erytrocytov pacienta, zhodné s krvnou skupinou pacienta. Erytrocyty sa trikrát premyjú fyziologickým roztokom (0,145 M NaCl), 100 μl citrátovej alebo defibrinovanej krvi sa pridá do 900 ml roztoku sacharózy a inkubuje sa 30 minút pri 37 °C alebo 23 °C. Potom sa skúmavky odstredia a supernatant sa vyhodnotí na viditeľnú hemolýzu. Ak dôjde k hemolýze, jej stupeň vyjadrený v percentách sa vypočíta z koncentrácie hemoglobínu v supernatante, ktorá sa stanoví kyanmethemoglobínovou metódou.

Vzorky plnej krvi sa zmiešajú v pomere 9:1 s 3,2 % citrátom sodným alebo 0,1 M roztokom oxalátu, celá krv sa defibrinuje pridaním 4 mm sklenenej guľôčky do 2 ml krvi. Alikvóty plnej krvi a plazmy bez krvných doštičiek sa zmiešajú v rôznych pomeroch. Izotonický roztok sacharózy sa pripraví rozpustením 0,27 mol špeciálneho činidla na sacharózu v 91 ml 50 mM NaH2P04 a 9 ml NaHP04. Hodnota pH sa v prípade potreby upraví na 6,1 pomocou malých koncentrácií NaOH. Do konečného objemu sa naleje 1000 ml vody.

Skúmavky sa odstredia a supernatant sa vyhodnotí na viditeľnú hemolýzu. Percento hemolýzy je vypočítaná hodnota vypočítaná z koncentrácie hemoglobínu v supernatante stanovenej kyanmethemoglobínovou metódou. Pripravte si aj ďalšie dve alikvotné časti – 100 % hemolýzu a „nulovú“ hemolýzu (bez erytrocytov) na vyhodnotenie vzorky.

Nevýhodou tejto metódy je nedostatočná citlivosť a špecifickosť pre diagnostiku ochorenia: minimálna detekovateľná veľkosť klonu - 4,2-5% nedáva presnú predstavu o veľkosti klonu, pričom môže byť prítomná v krvi pacienta pri nižšie hodnoty - menej ako 4,2%. Nevýhody metódy možno pripísať aj jej zložitosti.

Známy je aj spôsob diagnostiky klonu PNH (Rosse WF. Variations in the red cells in paroxyzmálna nočná hemoglobinúria. Br J Haematol 1973; 24:327-42.12), vrátane merania a analýzy stupňa hemolýzy pri rôzne koncentrácie komplementu. Táto analýza ukazuje, že PNH bunky lyzujú pri nižších koncentráciách ako normálne bunky.

Tento test identifikuje bunkové populácie so strednou citlivosťou na proteíny komplementu (typ II) medzi normálnymi erytrocytmi (typ I) a abnormálnymi erytrocytmi pri paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii (typ III). Metóda je však prácna a ťažko štandardizovateľná. Pri použití testu môžu chýbať malé populácie abnormálnych buniek.

Existuje známy spôsob izolácie retikulocytov pomocou CD71 na stanovenie klonu PNH prietokovou cytometriou medzi retikulocytmi a granulocytmi (Tsagarakis NJ, Paterakis G. Jednoduchý prietokový cytometrický test na rutinné testovanie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie na základe nezrelých retikulocytov a granulocytov, Clinical07.Cytometria. - C. 259-263) (http://onlinelibrary.wiley.coni/doi/10.1002/cyto.b.21030/full).

Vyšetruje sa celá krv pacienta, ktorá sa zriedi vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku v pomere 1:100. 50 ul zriedenej krvi sa pridá do dvoch skúmaviek, potom sa uskutoční farbenie: v prvej skúmavke 10 ul monoklonálnych protilátok (MCA) proti CD71 a 20 ul MCA proti CD59; Do druhej skúmavky sa pridá 10 ul IgGl izotypovej kontroly. Výsledky sa vyhodnocujú na jednoparametrových histogramoch.

Okrem toho metóda tiež analyzuje granulocyty s použitím kombinácií MCA: 1) CD59-FITC /CD24-PE /CD45-PE-Cy5/; 2) CD66b-FITC/CD16-PE/CD45-PE-Cy5.

Podľa tejto metódy je citlivosť stanovenia klonu PNH medzi granulocytmi 1 %, citlivosť stanovenia klonu PNH medzi retikulocytmi je 5 %. Navrhovaná metóda však bola testovaná na malom počte pacientov s paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou (n=8) a s PNH klonom menším ako 1 % (pri hodnotení na granulocytoch, a teda menej ako 5 % pri stanovení na retikulocytoch) ( n=7). Citlivosť detekcie klonu na retikulocytoch (5 %) tiež neumožňuje použitie techniky na súčasné vyhodnotenie klonu medzi granulocytmi a retikulocytmi. Zároveň medzi krvnými vzorkami pacientov s podozrením na PNH neboli žiadne vzorky s veľkosťou klonu 1-24 %, čo nedáva úplný obraz o korelácii hodnôt v tomto rozsahu. S týmto prístupom je hradlovanie retikulocytov ťažké kvôli absencii panerytrocytového markera (CD235a) v paneli, ktorý je obzvlášť potrebný na izoláciu čistej populácie a odrezanie zvyškov a dubletov. Okrem toho na objektívne vyhodnotenie klonu PNH musia byť hodnotené desiatky tisíc buniek. Jeden test podľa navrhovanej metódy spotrebuje veľké množstvo protilátok. Celkový počet zozbieraných udalostí podľa brány (podľa CD71) (2000 udalostí) nemusí stačiť na identifikáciu klonu.

Známy spôsob bol teda testovaný na malom počte pacientov s paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou a PNH-klonom, bunkami, ktoré sa nešpecificky spájajú s MCA s CD71, s najväčšou pravdepodobnosťou skreslia výsledky analýzy. Okrem toho sa na túto analýzu používa 6 typov monoklonálnych protilátok, z toho 2 dvakrát, čo sa odráža vo vysokej cene použitého panelu MCA. Metóda bola testovaná na 8 pacientoch s PNH, 7 z nich malo hodnotu klonu pod prahom citlivosti (1 % pre granulocyty, 5 % pre retikulocyty). Táto metóda nerieši problém spoľahlivej detekcie minoritných PNH klonov a nie je dôkazom vysokej citlivosti metódy.

Ako najbližší analóg je známy spôsob diagnostiky paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie prietokovou cytometriou navrhnutý Medzinárodnou asociáciou klinickej cytometrie (ICCS). (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Pokyny pre diagnostiku a monitorovanie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie a súvisiace poruchy prietokovou cytometriou, online: 28. APR 2010. DOI: 10.1002/cyto.b.20525).

Metóda zahŕňa štúdium prítomnosti GPI-asociovaných proteínov na granulocytoch, monocytoch a erytrocytoch. Štúdia pozostáva z dvoch fáz: príprava vzorky a následná analýza na prietokovom cytometri.

Na analýzu erytrocytov sa celá krv zriedi fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom v pomere 1:100, 10 μl plnej krvi sa pridá k 990 μl fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom; Potom sa 40 ul výslednej bunkovej suspenzie pridá do označenej skúmavky. Na zafarbenie erytrocytov sa do bunkovej suspenzie pridajú monoklonálne protilátky konjugované s fluorochrómami PE značenými CD235FITC a CD59. Po inkubácii s monoklonálnymi protilátkami počas 30 minút v tme sa vzorky premyjú od nenaviazaných monoklonálnych protilátok. Na analýzu erytrocytov sa premývanie uskutoční dvakrát odstredením vzorky v 4 ml fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku pri 1500 otáčkach za minútu počas 5 minút, potom sa odoberie supernatant, bunky sa resuspendujú, pridá sa 500 μl fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku. ďalšia analýza.

Na zber a analýzu erytrocytov na prietokovom cytometri sa pomocou softvéru zariadenia vytvárajú grafy:

Graf-FS(log) vs (proti) SS(log), na ktorom sa izoluje populácia erytrocytov (vytvorí bránu RBC) a vytriedia sa zvyšky, krvné doštičky a agregáty erytrocytov;

Graf CD235a(log) vs FS(log) odráža udalosti z brány RBC, aby sa jasnejšie rozlíšila populácia erytrocytov, populácia erytrocytov pozitívna na marker CD235a, aby sa vytvorila nová brána (CD235a+)

CD59(log) vs CD235a, (histogram ukazuje udalosti hradené CD235a+). Histogram odráža úroveň expresie CD59 na erytrocytoch. Bunky bez deficitu CD59 – typ I sú normálne erytrocyty, bunky s čiastočným deficitom expresie CD59 – klon PNH typu II, bunky, ktoré neexprimujú CD59, teda erytrocyty s úplným deficitom CD59 – ide o klon PNH typu III.

Podľa metódy sa zhromaždí najmenej 50 000 cytometrických udalostí.

Na prípravu analýzy granulocytov a monocytov sa do dvoch označených skúmaviek pridá 100 ul periférnej krvi. Ďalej na farbenie značenými monoklonálnymi protilátkami sa do každej skúmavky pridá kombinácia značených monoklonálnych protilátok:

kombinácia značených monoklonálnych protilátok na určenie klonu PNH medzi granulocytmi FLAER(AlexaFluor700) /CD15(PE)/CD24(PerCP)/CD45(PE-Cy7) (markery brány: CD45 a CD15, markery súvisiace s GPI FLAER a CD24) ;

kombinácia značených monoklonálnych protilátok na stanovenie PNH klonu medzi monocytmi FLAER(AlexaFluor700)/CD14PE/CD64PerCP/CD45PE-Cy7, kde hradlové markery sú: CD45 a CD64, GPI sú asociované markery FLAER a CD14;

Zafarbené vzorky sa inkubujú 30 minút pri teplote miestnosti v tme, potom sa k vzorke pridá 1 ml lyzačného roztoku, aby sa zbavili erytrocytov. Po inkubácii s lyzačným roztokom sa vzorky odstreďujú 5 minút pri 1500 ot./min., po odstredení sa supernatant scedí a leukocyty na dne skúmavky sa resuspendujú. Potom sa vzorky premyjú z lyzačného roztoku pridaním 2 ml fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku ku vzorke a následnou centrifugáciou počas 5 minút pri 1500 ot./min. Po odstredení sa supernatant odsaje, bunky sa resuspendujú a potom sa na ďalšiu analýzu pridá 500 ul fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom.

Na analýzu a odber granulocytov a monocytov na prietokovom cytometri sú pomocou softvéru prístroja vytvorené nasledujúce grafy:

Na grafe CD45(log) verzus SS oblasti lymfocytov CD45+LY (bunky oblasti s vysokou expresiou CD45, nízke hodnoty SS), monocytov CD45+MON (bunky strednej oblasti expresie CD45, vyššie hodnoty SS) a CD45+ GRAN granulocyty (bunkové oblasti s nízkou expresiou CD45, vysoké hodnoty SS).

Na analýzu klonu PNH medzi granulocytmi sa vynesie graf CD15 (log) vs SS v závislosti od brány (CD45+GRAN). Pomocou CD15+ brány sa izoluje populácia granulocytov bez zvyškov a buniek, ktoré neprišli do kontaktu s anti-CD15 monoklonálnymi protilátkami;

Histogram FLAER(log) vs CD24(log) (zostrojený v závislosti od brány CD15+. Na tomto grafe je vynesená brána PNH GRAN, ktorá zachytáva zónu negatívnu pre expresiu CD24 a FLAER. Neprítomnosť týchto markerov na granulocytoch naznačuje, že bunky patria ku klonu PNH.

Na vyhodnotenie klonu PNH medzi monocytmi sa skonštruuje graf -CD64(log) vs SS v závislosti od brány CD45 MON. V tomto grafe sú C064-pozitívne udalosti obmedzené na bránu CD64+MON. V závislosti od CD64+MON brány sa vynesie graf -FLAER(log) vs CD14(log) (v závislosti od izolovanej populácie CD64+ monocytov - brána). Na tomto grafe je skonštruovaná brána PNH MON, ktorá zachytáva negatívnu zónu pre expresiu CD14 a FLAER. Neprítomnosť týchto markerov na monocytoch naznačuje, že bunky patria ku klonu PNH.

Hodnota klonu PNH je percento buniek (granulocyty, monocyty, erytrocyty), medzi ktorými je pozorovaná absencia kotviacich proteínov spojených s GPI.

Štúdium klonu PNH podľa medzinárodného protokolu je „zlatým štandardom“ v diagnostike PNH. Štúdia je však finančne a časovo náročná. Príprava a analýza podľa tejto metódy trvá minimálne 2,5-3 hodiny.

Vzhľadom na to, že PNH je zriedkavé ochorenie, podľa rôznych zdrojov postihuje 1 až 10 ľudí na 1 milión obyvateľov, väčšina pacientov odoslaných na diagnostiku klonu PNH nebude PNH pozitívna. Preto nie je vhodné vykonávať časovo náročnú a nákladnú analýzu podľa medzinárodného protokolu u pacientov bez PNH, ale stačí odpovedať na otázku, či je prítomný PNH klon alebo nie. Za cenu značených monoklonálnych protilátok od 500 c.u. na jedno meno bude kompletný set protilátok a reagencií na diagnostiku PNH podľa medzinárodného prístupu stáť od 5000 USD. Vzhľadom na krátku trvanlivosť niektorých požadovaných činidiel možno aj v meste s 1 miliónom obyvateľov vyšetriť jednou súpravou 10 až 100 pacientov ročne, pričom náklady na jednu štúdiu môžu dosiahnuť až 500 AMERICKÝ DOLÁR.

Cieľom vynálezu je vytvoriť presnú, citlivú a na dôkazoch založenú metódu laboratórnej diagnostiky paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, ktorá sa dá ľahko vykonávať, je cenovo dostupná a umožňuje skríning paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie s minimálnymi materiálovými nákladmi.

Podstata vynálezu spočíva v tom, že pri metóde laboratórnej diagnostiky paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, zahŕňajúcej farbenie celej krvi pacienta monoklonálnymi protilátkami vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku, inkubáciu, premývanie krviniek z nenaviazaných monoklonálnych protilátok centrifugáciou, resuspendovanie hotovej vzorky, následné vyhodnotenie veľkosti klonu alebo jeho neprítomnosti v programe prietokového cytometra absenciou alebo prítomnosťou ochranných proteínov je trojfarebná kombinácia monoklonálnych protilátok CD235a (FITC)/CD59(PE)/CD71 (APC). používa sa na farbenie testovanej vzorky krvi, ktoré sa pridávajú do skúmavky so vzorkou, prítomnosť klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi sa hodnotí neprítomnosťou ochranného proteínu CD59 na membráne retikulocytov izolovaných bránou CD235a - panerytrocytový marker a CD71 receptor pre transferín; yat graf FSC(log) vs SSC(log), na ktorom sú retikulocyty izolované pomocou dodatočného hradla CD71str, čím sa populácia retikulocytov očistí od trosiek a dubletov metódou sekvenčného hradlovania, získané hodnoty ukazovateľov sa porovnajú s normálnymi kritériami a v prítomnosti 100 % pozitívnych na CD59 retikulocyty posúdiť neprítomnosť klonu PNH a diagnostikovať neprítomnosť ochorenia paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie. Ak sa u pacienta s klinickými príznakmi detegujú negatívne CD59 retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je viac ako 1 %, dávajú diagnostický záver o prítomnosti klonu PNH a na potvrdenie diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie dodatočný štúdia sa odporúča podľa medzinárodného štandardizovaného protokolu, ak sa zistia negatívne CD59 retikulocyty a získané ukazovatele 0,1-1% posúdia prítomnosť minoritného klonu PNH a odporučia opätovné stanovenie klonu PNH po 6 mesiacoch pre zvýšenie jej hodnotu a rozvoj paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, ak sa potvrdí táto veľkosť klonu, je diagnostikovaná subklinická forma paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie bez klinických príznakov .

Použitie vynálezu umožňuje získať nasledujúci technický výsledok.

Navrhovaná metóda na detekciu klonu PNH má vysokú spoľahlivosť, presnosť a citlivosť – 0,1 %, porovnateľnú s medzinárodnou štandardizovanou metodikou a je založená na dôkazoch.

Umožňuje určiť prítomnosť klonov PNH ako významnú veľkosť u pacientov so skutočnou paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou a menšími - od 0,01 do 1% u pacientov s aplastickou anémiou a myelodysplastickým syndrómom.

Metóda je jednoduchšia na implementáciu, nevyžaduje veľké materiálové náklady v porovnaní s medzinárodnou štandardizovanou metodikou.

Technológia detekcie klonov PNH umožňuje pri skríningu PNH (CD235a, CD71, CD59) použiť minimálny počet (tri) monoklonálnych protilátok.

Na štúdium krvi jedného pacienta sa používa iba jedna skúmavka, čo tiež zjednodušuje a urýchľuje analýzu.

Čas strávený na vykonaní jedného testu je 40-50 minút. Použitím menšieho množstva protilátok bez použitia lyzačných roztokov je analýza lacnejšia o približne 75 % na test. Zároveň je zachovaná vysoká citlivosť a diagnostická presnosť.

Vo väčšine prípadov sa metóda vyhýba dodatočným nákladom spojeným s použitím väčšieho množstva protilátok, pretože vzhľadom na zriedkavý výskyt ochorenia je výsledok často negatívny. Táto technika je vhodná na skríning pacientov a je dostupná pre zdravotnícke zariadenia rôznych profilov, ako aj pre všetky kategórie občanov.

Konečný výsledok analýzy v navrhovanej metóde je prezentovaný ako percento erytrocytov a retikulocytov s defektom v proteínoch súvisiacich s GPI, to znamená klon PNH. Technika umožňuje určiť zvýšené riziko trombózy na základe percenta zisteného klonu PNH.

Navrhovaná metóda je výhodnejšia v porovnaní s niektorými inými známymi metódami - Hamov test, sacharózový test, meranie stupňa hemolýzy pri rôznych koncentráciách proteínov komplementového systému.

Technický výsledok je dosiahnutý vďaka autormi vyvinutej novej technológii na stanovenie klonu PNH pri paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii pomocou prietokovej cytometrie, ktorej algoritmus umožňuje stanovenie tohto klonu na retikulocytoch a erytrocytoch (oproti štandardne stanovenému na neutrofiloch, monocytoch a erytrocytoch). Autori ako prví používajú kombináciu protilátok CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC). Podľa navrhovanej metódy sa v čase analýzy dát používa dodatočný postup multiparametrického hradlovania CD71+ buniek a vylúčenia debris, dubletov z analýzy a likvidácie nešpecificky viazaných monoklonálnych protilátok.

Kľúčovým bodom je štúdium retikulocytov, ktoré sa podľa autormi vyvinutej technológie izolujú pomocou protilátok proti CD71 a vyšetrujú pomocou kombinácie troch vybraných monoklonálnych protilátok CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC). od autorov. Klon PNH medzi retikulocytmi odráža skutočnú hodnotu klonu PNH, autori porovnali získané hodnoty klonov PNH medzi retikulocytmi s hodnotami získanými pomocou štandardizovaného medzinárodného prístupu k diagnostike PNH. Objemová korelácia PNH-pozitívnych retikulocytov s monocytmi je 0,95, s granulocytmi - 0,93. Percento PNH-pozitívnych erytrocytov podľa navrhovanej metódy sa meria s vyššou citlivosťou v porovnaní s medzinárodným štandardizovaným prístupom, pretože navrhovanou metódou sa vyšetrí najmenej 1 000 000 erytrocytov a podľa ICCS len 500 000.

Prvýkrát bol klon PNH študovaný na retikulocytoch pomocou kombinácie monoklonálnych protilátok CD235a/CD71/CD59, čo umožnilo odhadnúť veľkosť tohto klonu so senzitivitou 100 %.

Výsledkom bolo, že bolo možné skrínovať PNH pomocou troch monoklonálnych protilátok. Použitie dodatočného štádia izolácie retikulocytov a „odrezanie“ buniek, ktoré sa špecificky neviazali na monoklonálne protilátky (na grafe FS vs SS, obr.), poskytuje presný výsledok, ktorý umožňuje potvrdiť diagnózu PNH na základe skríningu. a vykonávanie účinnej adekvátnej liečby.

Spôsob sa uskutočňuje nasledovne.

Na účely štúdie sa pacientovi odoberie venózna krv do skúmavky s antikoagulantom K2EDTA. Skúmavka sa do laboratória dodáva z ošetrovne zdravotníckeho zariadenia.

Na analýzu erytrocytov a retikulocytov sa celá krv zriedi v samostatnej polystyrénovej skúmavke. Na zriedenie fyziologickým roztokom pufrovaným fosforečnanom v pomere 1:10 sa 50 μl plnej krvi pridá do 450 μl fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom a dôkladne sa premieša 5 sekúnd na vortexe, potom sa pridá 40 μl výslednej bunkovej suspenzie. do označenej skúmavky.

Na zafarbenie vzorky sa použije trojfarebná kombinácia monoklonálnych protilátok CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC). Farbenie sa vykonáva postupným pridávaním 3 μl značených monoklonálnych protilátok ku vzorke, potom sa skúmavka trepe 5 sekúnd na vortexe. Potom inkubujte 15 minút v tme pri izbovej teplote.

Potom sa krvinky dvakrát premyjú v 4 ml fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku v režime odstreďovania počas 5 minút pri frekvencii 1500 ot./min. Po každej centrifugácii opatrne odoberte supernatant pipetou tak, aby bunky zostali na dne skúmavky.

Pripravená vzorka sa resuspenduje na 5 sekúnd na vortexe a pridá sa 750 μl fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku, po čom je vzorka pripravená na analýzu na prietokovom cytometri.

Potom vyhodnoťte a zaznamenajte výsledky pomocou viacfarebnej prietokovej cytometrie. Analýza sa môže uskutočniť na ľubovoľnom prietokovom cytometri vybavenom detektormi pre najmenej tri fluorescenčné kanály.

Merania sa uskutočňujú na prietokovom cytometri BD FACSCanto™ II Becton-Dickinson (USA).

Stanovenie prítomnosti alebo neprítomnosti klonu PNH na erytrocytoch a retikulocytoch, ako aj veľkosť klonu PNH, sa uskutočňuje na prietokovom cytometri pomocou špeciálneho softvéru.

Na posúdenie klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi sa zostaví graf - FSC(log) vs SSC(log), pomocou logického obmedzenia sa izoluje oblasť erytrocytov, s výnimkou zvyškov a dubletov (obr. 1a).

CD235a+ brána sa potom skonštruuje na FSC(log) verzus CD235a grafe (obr. lb), čím sa obmedzia pozitívne bunky a vylúčia sa udalosti nešpecificky viazané na CD235a (trosky a bunky nepatriace do CD235a+ populácie).

Udalosti vstupujúce do CD235a+ brány sa analyzujú na CD71 vs FSC(log) grafe (obr. le), ktorý zvýrazňuje CD71 pozitívnu populáciu.

Na objektívne posúdenie PNH klonu medzi retikulocytmi sa v CD71+ bráne zhromaždí aspoň 20 000 udalostí.

V závislosti od brány CD71+ sa zostaví graf FSC(log) vs. SSC(log) (obr. 1f), na ktorom sa izolujú retikulocyty pomocou dodatočnej brány CD71str, a tak sa populácia konečne zbaví trosiek a dubletov metódou. sekvenčného hradlovania.

Ďalej je vynesený graf CD235a vs CD59 (obr. 1g) proti CD71str gate (izolované retikulocyty). Na tomto grafe sú rozlíšené dve oblasti Norm°Ret a PNH°Ret (obr. 1g), ide o hranice normálnych a PNH-pozitívnych retikulocytov. Štatistiky sú zobrazené v absolútnych hodnotách a % brány (obr. 1d a 1h).

Protokoly zberu údajov sa nastavujú raz a neskôr sú potrebné len drobné úpravy.

Hradlo CD235a+ v prvej fáze zberu dát je zastavovacia brána, t.j. zhromažďuje 1 000 000 udalostí. Hradlo CD235a+ sa aplikuje na graf CD235a verzus CD59 (obr. lc). Ak nie je viac ako 10 udalostí v oblastiach PNH typu II a PNH typu III na grafe CD235a verzus CD59, zber údajov sa zastaví a urobí sa záver, že neexistuje žiadny klon PNH.

S väčším počtom podujatí celkovo v týchto regiónoch štúdia pokračuje.

Klon PNH medzi retikulocytmi predstavuje percento retikulocytov, ktorým chýba ochranný proteín CD59.

V prítomnosti 100 % pozitívnych na CD59 retikulocyty sa posudzuje neprítomnosť klonu PNH a diagnostikuje sa neprítomnosť paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie.

Ak sú u pacienta s klinickými príznakmi zistené negatívne CD59-retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je viac ako 1 %, dávajú diagnostický záver o prítomnosti klonu PNH a na potvrdenie diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie odporúča sa dodatočná štúdia podľa medzinárodného štandardizovaného protokolu (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Pokyny na diagnostiku a monitorovanie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie a súvisiacich porúch prietokovou cytometriou).

Keď nie sú detegované žiadne CD59-retikulocyty negatívne a hodnota získaných indikátorov je 0,1-1 %, posúdi sa prítomnosť minoritného PNH klonu. V tomto prípade sa odporúča po 6 mesiacoch znovu stanoviť klon PNH, aby sa zvýšila jeho hodnota a rozvinula sa paroxyzmálna nočná hemoglobinúria.

Keď sa táto veľkosť klonu potvrdí prietokovou cytometriou podľa medzinárodného protokolu, diagnostikuje sa subklinická forma paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie bez klinických príznakov alebo sa posúdi klon PNH spojený s AA a MDS, keď sa podľa odporúčaní urobia vhodné diagnózy (International PNH záujmová skupina (I-PIG)).

Metóda prešla klinickými skúškami na oddelení klinickej laboratórnej diagnostiky RMAPE. Vyšetrili sme 572 pacientov odoslaných z rôznych nemocníc s predbežnou diagnózou alebo s podozrením na paroxyzmálnu nočnú hemoglobinúriu (PNH), aplastickú anémiu (AA), myelodysplastický syndróm (MPS), autoimunitnú hemolytickú anémiu (AIHA), vo veku 12 až 82 rokov.

Všetci pacienti boli diagnostikovaní podľa navrhovanej metódy metódou viacfarebnej prietokovej cytometrie, ako aj podľa medzinárodného štandardizovaného prístupu.

Bola stanovená neprítomnosť ochranného proteínu CD59 na membráne retikulocytov izolovaných pomocou CD235a (marker panerytrocytov) a CD71 (receptor transferínu) a ďalej purifikovaných sekvenčným hradlovaním pomocou parametrov rozptylu svetla FS/SS, vysoká korelácia objemu PNH klon meraný medzi retikulocytmi bol dokázaný podľa metódy s PNH-klonom medzi granulocytmi a monocytmi, meraný podľa medzinárodného štandardizovaného prístupu.

Vyšetrených bolo 572 ľudí vo veku 15 až 64 rokov, z toho 248 mužov a 324 žien. Z 572 vyšetrených pacientov sa klon PNH našiel u 175 pacientov, hodnoty sa pohybovali od 0,1 % do 99,7 % (medián 41,6 %). Medzi nimi 78 mužov a 97 žien. Všetci pacienti podstúpili paralelné štúdie klonu PNH podľa medzinárodného štandardizovaného prístupu a s použitím navrhovanej metódy. Korelácia medzi hodnotou PNH-klonu medzi retikulocytmi a granulocytmi bola 0,93, medzi retikulocytmi a monocytmi 0,95, v uvedenom poradí. Senzitivita metódy bola 98,9 %, špecificita 99,8 %, celková presnosť 99,7 %.

Vo všeobecnosti je pri aplastickej anémii a myelodysplastickom syndróme klon PNH menší ako 1 %. Podľa odporúčaní by sa klony tejto veľkosti mali študovať v dynamike s frekvenciou 1 krát za 6 mesiacov. So zväčšením veľkosti klonu a zodpovedajúcimi klinickými príznakmi hovoríme o diagnóze PNH.

Príklad. Pacient M., 34-ročný, bol pod dohľadom hematológa. Po ARVI došlo k zvýšeniu slabosti, žltačky a stmavnutia moču.

Pacient bol prijatý na oddelenie zdravotníckeho zariadenia (MPU) so sťažnosťami na slabosť a tmavnutie moču.

Na poliklinike zdravotníckeho zariadenia bolo vykonané plánované vyšetrenie. Objektívne vyšetrenie odhalilo ikterus kože a viditeľné sliznice. Pacient bol hospitalizovaný na hematologickom oddelení so sťažnosťami na celkovú slabosť, malátnosť, dýchavičnosť, tachykardiu, tmavý moč, znížený hemoglobín a červené krvinky.

Skúmavka so vzorkou periférnej krvi stabilizovaná K 2 EDTA bola zaslaná na Oddelenie klinickej laboratórnej diagnostiky Ruskej lekárskej akadémie postgraduálneho vzdelávania do referenčného centra pre štúdium PNH na identifikáciu klonu PNH pomocou prietokovej cytometrie. Analýza klonu PNH medzi granulocytmi, monocytmi a erytrocytmi sa uskutočnila podľa medzinárodného protokolu a štúdia klonu PNH sa uskutočnila navrhovanou metódou na erytrocytoch a retikulocytoch.

Zároveň sa uskutočnila štúdia klonu PNH podľa medzinárodného protokolu a podľa navrhovanej metódy (opakovanie predchádzajúceho návrhu!). Podľa medzinárodného protokolu bola vzorka zafarbená na detekciu klonu PNH medzi granulocytmi, monocytmi a erytrocytmi a podľa metódy navrhnutej autormi na detekciu klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi. Podľa navrhovaného spôsobu bola vzorka zafarbená monoklonálnymi protilátkami proti CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC) tak, že sa postupne vniesli do 40 μl zriedenej 1:10 plnej krvi.

Po inkubácii počas 15 minút v tme sa bunky dvakrát premyli v 4 ml fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku v režime centrifugácie počas 5 minút pri frekvencii 1500 ot./min.

Po každej centrifugácii sa supernatant odstránil, zatiaľ čo bunky zostali na dne skúmavky.

Pripravená vzorka sa resuspendovala 5 sekúnd na vortexe a pridalo sa 750 ul PBS.

Na štúdium erytrocytov a retikulocytov na grafe FSC (log) vs SSC (log) bola identifikovaná oblasť erytrocytov s výnimkou zvyškov a dubletov.

Potom sa na grafe FSC(log) verzus CD235a izolovali CD235a-pozitívne bunky, s výnimkou zvyškov a buniek iných ako CD235a+, ktoré sa nešpecificky viazali na monoklonálne protilátky anti-CD235a. Udalosti zahrnuté v bráne CD235a+ sa analyzovali na grafe CD71 vs FSC(log) a identifikovala sa populácia pozitívna na CD71.

Na objektívne posúdenie PNH klonu medzi retikulocytmi v CD71+ bráne sa zozbieralo aspoň 20 000 udalostí.

FSC(log) vs SSC(log) sa vynieslo v závislosti od brány CD71+. Potom sa pomocou dodatočného hradla CD71str na tomto grafe izolovala populácia retikulocytov, ktorá sa tak sekvenčným hradlovaním očistila od zvyškov a dubletov.

Ďalej, na grafe CD235a vs CD59, v závislosti od brány CD71str (izolované retikulocyty), sa retikulocyty hodnotili na prítomnosť GPI-asociovaného CD59 proteínu na membránach retikulocytov, v tomto poradí, na PNH-pozitívnych a PNH-negatívnych bunkách. Štatistické údaje sa prejavili v absolútnych hodnotách a % brány.

Pri izolácii retikulocytov pomocou CD71 a následnej purifikácii z odpadu bola populácia buniek CD59 97,6 %. S použitím navrhovanej metódy sa teda detegoval PNH klon.

Štúdia podľa medzinárodného protokolu na detekciu PNH potvrdila, že klon PNH je prítomný na granulocytoch, monocytoch a erytrocytoch v množstve 99,2 %, 97,6 % a 71,0 %, čo svedčí o reprodukovateľnosti výsledkov navrhovaných a štandardné metódy. Tento test slúžil ako základ pre diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie.

Klinické štúdie ukázali, že navrhovaná metóda má vysokú spoľahlivosť, presnosť a citlivosť (0,1% klon PNH), umožňuje určiť prítomnosť vysokých hodnôt klonu u pacientov s paroxyzmálnou nočnou hemoglobinúriou a menších hodnôt ( od 0,1 %) u pacientov s aplastickou anémiou, myelodysplastickým syndrómom. Navrhovaná metóda sa ľahko vykonáva, nevyžaduje veľké náklady na materiál, jeden test trvá 40-50 minút.

Táto technika je vhodná na skríning pacientov a je dostupná pre zdravotnícke zariadenia rôznych profilov, ako aj pre všetky kategórie občanov.

Metóda laboratórnej diagnostiky paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, ktorá zahŕňa farbenie celej krvi pacienta monoklonálnymi protilátkami vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom, inkubáciu, premytie krviniek z nenaviazaných monoklonálnych protilátok centrifugáciou, resuspendovanie hotovej vzorky, následné posúdenie veľkosti klonu resp. absencia v programe prietokového cytometra absenciou alebo prítomnosťou ochranných proteínov, vyznačujúca sa tým, že na zafarbenie testovanej vzorky krvi je použitá trojfarebná kombinácia monoklonálnych protilátok CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC), ktoré sa pridávajú do skúmavky so vzorkou, prítomnosť klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi sa hodnotí podľa neprítomnosti ochranného proteínu CD59 na membráne retikulocytov izolovaných bránou CD235a - marker panerytrocytov a CD71 - receptor. pre transferín sa zhromaždí najmenej 20 000 udalostí v bráne CD71+ na vyhodnotenie klonu PNH medzi retikulocytmi v bráne CD71+, v závislosti od brány CD71+ sa vynesie graf FSC (log) vs SSC(log), na ktorom sa retikulocyty izolujú pomocou dodatočného hradla CD71str, čím sa populácia retikulocytov vyčistí od zvyškov a dubletov metódou postupného hradlovania, získané hodnoty indikátorov sa porovnajú s normálnymi kritériami a v prítomnosti 100% pozitívnych na CD59 retikulocyty sa posúdi neprítomnosť PNH -klon a diagnostikuje sa neprítomnosť ochorenia paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, ak sa zistí pacient s klinickými príznakmi negatívnych CD59 retikulocytov a hodnota získaných ukazovateľov. je viac ako 1 %, dávajú diagnostický záver o prítomnosti klonu PNH a na potvrdenie diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie sa odporúča dodatočná štúdia podľa medzinárodného štandardizovaného protokolu, ak sa zistí negatívny výsledok na retikulocyty CD59 a hodnota získaných ukazovateľov je 0,1-1%, posudzuje sa prítomnosť minoritného PNH klonu a odporúča sa opakované stanovenie PNH klonu po 6 mesiacoch pre zvýšenie jeho hodnoty a rozvoj paroxyzmálnej h. nočná hemoglobinúria, pri potvrdení tejto veľkosti klonu sa bez klinických príznakov diagnostikuje subklinická forma paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie.

Podobné patenty:

Vynález sa týka medicíny, menovite oftalmológie, a môže sa použiť na diagnostiku hereditárnej neuropatie zrakového nervu (HON). Na tento účel sa uskutočňujú klinické a cytologické štúdie a okrem toho sa z kože pacienta získa kultúra fibroblastov s hustotou 5 000 – 10 000 buniek na cm2, zafarbená mitochondriálnym napäťovo závislým fluorescenčným farbivom TMRE na konečnú koncentráciu 25 nM.

Vynález sa týka medicíny a opisuje chemiluminiscenčné činidlo na stanovenie prítomnosti a/alebo množstva analytu vo vzorke s očakávaným obsahom analytu, pričom činidlo je nedispergovateľné a rozpustné vo vodnom prostredí a obsahuje väzobného partnera. pre analyt a chemiluminiscenčnú kompozíciu obsahujúcu olefínovú zlúčeninu a kovový chelát, pričom olefínovou zlúčeninou je zlúčenina, ktorá je schopná reagovať s singletovým kyslíkom v 2+2 prídavku za vzniku dioxetánu alebo ktorá je schopná reagovať s singletovým kyslíkom v 4+2 cykloadícia s diénmi a kde kov alebo chelát kovu je kov vzácnych zemín alebo kov skupiny VIII, a kde je kov koordinovaný s dvoma alebo viacerými atómami tej istej molekuly alebo chelatačné činidlo, kde dva alebo viac atómov a R2 sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z kyslíka, dusíka a síry.

LÁTKA: skupina vynálezov sa týka medicíny, menovite imunológie, a možno ju použiť na stanovenie ex vivo účinnosti liečby rakoviny. Za týmto účelom sa po podaní jednej alebo viacerých dávok imunogénnej kompozície subjektu meria hladina aktivovaných T-lymfocytov (CD3+ CD69+) v tele.

Vynález sa týka oblasti biotechnológie a možno ho použiť na stanovenie ľudského genotypu polymorfizmom v géne matricovej metaloproteinázy MMP9-1562 C>T (rs3918242).

[0001] Vynález sa týka spôsobu stanovenia biologickej aktivity embryonálnych vajíčok Trichuris. Charakterizovaná metóda zahŕňa vykonanie najmenej 3 testov vybraných z: - hodnotenia a/alebo potvrdenia štádia embryonálneho vývoja vajíčok pomocou metódy kvantitatívnej PCR s použitím vhodných markerových sekvencií na určenie počtu kópií genómovej DNA, - hodnotenia metabolickej aktivity embryonálnych vajíčok pomocou biochemických a/alebo molekulárno-biologických metód, - posúdenie indukovateľnosti génovej expresie v embryonálnych vajíčkach, - posúdenie pohyblivosti lariev Trichurs pomocou mikroskopu počas dlhších období pozorovania po predinkubácii pri zvýšených teplotách, a/alebo - posúdenie rýchlosti liahnutia lariev Trichuris v tele laboratórneho zvieraťa.

Vynález sa týka medicíny, menovite kardiológie, a môže byť použitý na predpovedanie rizika kardiovaskulárnej mortality u pacientov s postinfarktovým chronickým srdcovým zlyhaním spojeným s diabetes mellitus 2. typu.

Vynález sa týka medicíny, menovite onkológie a klinickej biochémie. Podstata metódy spočíva v tom, že fixované bunky periférnej krvi sa ošetria primárnymi protilátkami proti proteínu viažucemu estrogén, ktoré špecificky interagujú s antigénmi na povrchu segmentovaných granulocytov, potom sa k výslednému antigénu pridajú sekundárne protidruhové fluorescenčne značené protilátky. -komplex protilátky a v prítomnosti farbenia povrchu segmentovaných granulocytov sú diagnostikované malígne novotvary a v neprítomnosti farbenia povrchu segmentovaných granulocytov sa diagnostikujú benígne novotvary.

Vynález sa týka medicíny, menovite onkológie, a môže byť použitý na predpovedanie vývoja hematogénnych metastáz po kombinovanej liečbe rakoviny obličiek.

Vynález sa týka medicíny, menovite pôrodníctva a gynekológie, a môže byť použitý na predpovedanie intrauterinnej retardácie rastu plodu. Na tento účel sa vo venóznej krvi ženy v počiatočných štádiách tehotenstva zisťuje relatívny obsah CD3 + CD16 + 56 + lymfocytov, hladina C3 zložky komplementu a rozpustného receptora tumor nekrotizujúceho faktora (sTNF-R) sú určené.

Vynález sa týka medicíny, menovite gastroenterológie, a možno ho použiť na diagnostiku hnisajúcej postnekrotickej pankreatickej pseudocysty. Na tento účel sa v krvi pacienta stanoví aktivita fagocytov pomocou hladiny expresie CD 14+/HLA-DR+ prietokovou cytometriou a štatistickou ROC analýzou. Keď je obsah CD14+/HLA-DR+ pod 85 %, diagnostikuje sa hnisajúca postnekrotická pankreatická pseudocysta. Použitie tejto metódy umožňuje diagnostikovať hnisavú postnekrotickú pseudocystu pankreasu, čo umožňuje určiť taktiku riadenia takýchto pacientov a vykonať výber chirurgickej intervencie. 2 napr., 1 tab.

Vynález sa týka medicíny, menovite onkohematológie, a môže byť použitý na predpovedanie vývoja prežívania bez ochorenia u pacientov s mnohopočetným myelómom po autológnej transplantácii krvotvorných kmeňových buniek. Cieľom vynálezu je zjednodušiť spôsob predpovedania prežitia bez ochorenia u pacientov s mnohopočetným myelómom po AHSCT. Metóda na predpovedanie prežívania bez relapsu u pacientov s mnohopočetným myelómom po autológnej transplantácii hematopoetických kmeňových buniek (AHSC) zahŕňa prietokovú cytometriu a hodnotenie relatívneho obsahu jednej z populácií lymfocytov pomocou jej prahovej hodnoty. V navrhovanom spôsobe sa po zákroku aferézy pred transplantáciou stanoví relatívny počet CD45+CD19+ B-buniek v produkte aferézy pacienta, a ak je obsah CD45+CD19+ B-buniek viac ako 2,5 %, kratší predpokladá sa obdobie prežitia bez relapsu po AHSCT a ak obsah CD45+CD19+ B-buniek nižší ako 2,5 % predpovedá dlhšie prežitie bez relapsu po AHSCT. 1 chorý.

[0001] Vynález sa týka oblasti medicíny, menovite imunológie, a môže byť použitý na hodnotenie reakcie transformácie lymfocytových blastov. Na tento účel sa brucelín používa na špecifickú aktiváciu lymfocytov. Detekcia blastických foriem lymfocytov sa uskutočňuje pomocou monoklonálnych protilátok proti CD34, po čom nasleduje počítanie buniek prietokovou cytometriou. Použitie tejto metódy umožňuje registráciu brucelínom aktivovaných lymfocytov v RBTL pomocou monoklonálnych protilátok CD34 u pacientov s brucelózou a zdravých darcov. 1 tab.

Vynález sa týka medicíny, menovite imunológie, a môže sa použiť na detekciu protilátok proti alogénnemu HLA-G v krvnom sére. Na tento účel použite test krížovej kompatibility (krížová zhoda) darcovských mononukleárnych buniek so sérom príjemcu. Mononukleárne subpopulácie sa analyzujú prietokovou cytofluorometriou na väzbu HLA-G monoklonálnych protilátok a hodnotí sa stupeň expresie HLA-G na experimentálnych a kontrolných darcovských mononukleárnych bunkách. Významné sú zároveň subpopulácie CD3-HLA-G+ a CD3+HLA-G+, podľa ktorých sa v experimentálnom nastavení vypočíta koeficient supresie (KF) vo vzťahu ku kontrolnému podľa vzorca: SP HLA- G = (H L A − G O P − H L A − G K O N T) H L A − G KO N T × 100, kde HLA-Gop je celkový relatívny počet subpopulácií exprimujúcich HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) v experimentálne nastavenie, %; HLA-Gcont - celkový relatívny počet subpopulácií exprimujúcich HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) v kontrolnom nastavení, %. Zároveň je diagnostikovaná prítomnosť senzibilizácie na alogénny HLA-G s negatívnou hodnotou CPHLA-G. Použitie tejto metódy umožňuje zistiť alogénnu senzibilizáciu na HLA-G pomocou prietokovej cytometrie, pričom sa stanovia subpopulácie CD3-HLA-G+ a CD3+HLA-G+. 3 pr., 3 chor., 2 tab.

Vynález sa týka medicíny, menovite pôrodníctva a gynekológie, a môže byť použitý na predpovedanie recidívy hroziaceho potratu. Na tento účel sa vykonáva imunologická štúdia periférnej venóznej krvi v 7-12 týždni tehotenstva u žien s hrozbou potratu. Po liečbe hroziaceho potratu sa stanoví relatívny obsah CD45RA-CD62L- v populácii CD8+ lymfocytov. Ak je jeho hodnota vyššia ako 23,9 %, u žien s anamnézou opakovaného potratu sa predpokladá hroziaci potrat v druhom trimestri. Použitie tejto metódy umožňuje predpovedať recidívu hroziaceho potratu v druhom trimestri gravidity, čo umožní zvoliť správnu taktiku manažmentu tehotnej ženy a zníži frekvenciu tejto komplikácie. 1 tab., 4 pr.

Vynález sa týka medicíny, menovite transfuziológie, a môže sa použiť na kontrolu účinnosti ožarovania darcovskej krvi. Metóda zahŕňa fázovanie reakcie blastickej transformácie krvných buniek s mitogénnym fytohemaglutinínom a zohľadnenie výsledkov reakcie stanovením indexu stimulácie lymfocytov. Reakcia je nastavená vo vzťahu k ožiarenej krvi darcu, výsledky sú zaznamenávané pomocou prietokového cytometra s použitím monoklonálnych protilátok značených rôznymi fluorochrómami, hradlovaním aktivovaných lymfocytov so zníženou expresiou bežného leukocytového markera CD45 a stanovením percenta dvojito negatívneho T -lymfocyty s imunofenotypom CD3+ medzi nimi CD4-CD8-, pričom sa odoberie neožiarená vzorka tej istej krvi ako kontrola. Potom sa účinnosť ožiarenia určí pomerom obsahu dvojito negatívnych T-lymfocytov s imunofenotypom CD3+CD4-CD8- v testovanej ožiarenej a rovnakej neožiarenej kontrolnej krvi ako negatívne T-lymfocyty s tzv. imunofenotyp CD3+CD4-CD8- v experimente (v testovanej ožiarenej krvi), Sdntlk - percento dvojito negatívnych T-lymfocytov s imunofenotypom CD3+CD4-CD8- v kontrole (v neožiarenej vzorke zn. rovnaká krv). Ak je rozdiel oproti kontrole viac ako 50 %, robí sa záver o funkčnej menejcennosti T-lymfocytov v ožiarenej krvi a imunologickej bezpečnosti tohto krvného produktu pre príjemcu. Použitie tejto metódy umožňuje určiť účinnosť ožarovania darcovskej krvi prietokovou cytometriou.

Vynález sa týka medicíny, menovite pôrodníctva a gynekológie, a umožňuje predpovedať hroziaci neskorý potrat u tehotných žien. Za týmto účelom sa v období 5-12 týždňov tehotenstva stanoví relatívny počet CD178+ monocytov gestácie v periférnej žilovej krvi. S jeho hodnotou rovnajúcou sa 37,7 % alebo menej v monocytárnej bráne sa predpovedá hroziaci neskorý potrat u žien s hroziacim potratom na začiatku tehotenstva a s anamnézou opakovaného potratu. Použitie tejto metódy vám umožňuje zvoliť správnu taktiku tehotenstva, vykonať súbor terapeutických a preventívnych opatrení a znížiť riziko komplikácií a nepriaznivých výsledkov tehotenstva v skupine žien s vysokým rizikom potratu. 3 pr., 1 tab.

Vynález sa týka medicíny, menovite pôrodníctva, a týka sa voľby taktiky liečby tehotných žien s placentárnou insuficienciou a syndrómom retardácie rastu plodu (FGR). Na tento účel sa u pacientov s fetoplacentárnou insuficienciou a IGR v krvnom sére pomocou enzýmovej imunoanalýzy stanoví aktivita superoxiddismutázy, obsah placentárneho rastového faktora, endoglín a melatonín. Na základe týchto ukazovateľov sa vypočíta predikčný koeficient P pomocou vzorca: P=(0,0001*CHSK+0,0255*Mel+0,1636*CD105+(-0,0487*PGF)-8,5389, kde CHSK je superoxiddismutáza, pg/ml, Mel - melatonín, pg / ml, CD 105 - endoglín, pg / ml, PGF - placentárny rastový faktor, pg / ml Pri hodnote P 0,64 a viac sa predpokladá vysoké riziko rozvoja kritického stavu plodu v prenatálnom období , ktorá vyžaduje ukončenie tehotenstva núdzovým cisárskym rezom v záujme plodu.

Vynález sa týka medicíny, menovite otolaryngológie, a môže byť použitý na diferenciálnu expresnú diagnostiku akútnej vírusovej a bakteriálnej tonzilitídy u dospelých. Na tento účel sa vykoná odber periférnej krvi a stanoví sa relatívny obsah subpopulácií neutrofilných granulocytov súčasne exprimujúcich CD16, CD11b na povrchovej membráne. Prítomnosť subpopulácie CD16brightCD11bdimNG% od 80 do 99,9% s vysokou hustotou expresie CD16 a nízkou hustotou expresie CD11b sa považuje za normu. Ak sa subpopulácia CD16brightCD11bbrightNG alebo CD16dimCD11bbrightNG deteguje v množstve 40 % alebo viac, určí sa akútna vírusová infekcia alebo akútna bakteriálna infekcia. Použitie tejto metódy umožňuje zabezpečiť presnosť diferenciálnej diagnostiky akútnej vírusovej a bakteriálnej tonzilitídy u dospelých. 3 pr., 1 tab.

LÁTKA: skupina vynálezov sa týka medicíny, menovite laboratórnej diagnostiky, a možno ju použiť na súčasnú identifikáciu zástupcov podmienených taxonomických skupín mikroorganizmov patogénnych pre ľudí a zvieratá. Vyznačuje sa použitím najmenej piatich imunochromatografických prúžkových testov umiestnených v jednom kryte. Súčasne sú v prvom a druhom kanáli tela zariadenia prúžkové testy na detekciu toxínov, v treťom kanáli - prúžkový test na detekciu vegetatívnych foriem baktérií, vo štvrtom - spórové formy baktérií a v piaty - prúžkový test na detekciu živného média na kultiváciu vírusov.a rickettsie. Testovanie sa vykonáva tak, že sa telo testov s imunochromatografickými prúžkami vloží do tepelne izolačného vrecka na cephlen pozostávajúce z dvoch vrstiev ceflenu, medzi ktorými je tepelne izolačné tesnenie vyrobené z porézneho tepelne izolačného materiálu, a do tela testov na imunochromatografických prúžkov vnútri vrecka sa zahrieva zdrojom konštantného tepla a otvor vrecka sa uzavrie mechanickou svorkou a tento moment považujte za začiatok testovania. Navrhuje sa aj zariadenie na imunochromatografickú analýzu. ÚČINOK: skupina vynálezov umožňuje zvýšiť produktivitu imunochromatografickej analýzy, rozšíriť teplotný rozsah imunochromatografickej analýzy z mínus 20 na plus 50 °C, skrátiť čas na získanie výsledku na 10 minút v porovnaní s analýzou pri izbovej teplote (20 minút), za predpokladu, že sa dosiahne rovnaká citlivosť, zvýšte citlivosť analýzy v porovnaní s analýzou vykonanou pri izbovej teplote. 2 n. a 7 z.p. f-ly, 5 ill., 4 tab., 8 pr.

Vynález sa týka medicíny, menovite laboratórnej diagnostiky, a môže byť použitý na diagnostiku paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie. Na tento účel sa vzorka testovanej krvi zafarbí monoklonálnymi protilátkami CD235aCD59CD71. Prítomnosť klonu PNH medzi erytrocytmi a retikulocytmi sa hodnotí podľa neprítomnosti ochranného proteínu CD59 na membráne retikulocytov izolovanej bránou CD235a - panerytrocytový marker a CD71 - receptor pre transferín. Na vyhodnotenie klonu PNH medzi retikulocytmi sa zhromaždí aspoň 20 000 udalostí v CD71+ bráne; V prítomnosti 100 CD59 pozitívnych retikulocytov sa posudzuje neprítomnosť klonu PNH a diagnostikuje sa neprítomnosť paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie. Ak sa u pacienta s klinickými príznakmi zistia negatívne CD59 retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je väčšia ako 1, urobí sa diagnostický záver o prítomnosti klonu PNH a odporúča sa dodatočná štúdia na potvrdenie diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie podľa medzinárodného štandardizovaného protokolu. Ak sa zistia CD59-negatívne retikulocyty a hodnota získaných ukazovateľov je 0,1-1, posúdi sa prítomnosť minoritného PNH klonu a po 6 mesiacoch sa odporúča opätovné stanovenie PNH klonu pre zvýšenie jeho hodnoty a rozvoj paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie a po potvrdení tejto veľkosti klonu diagnostikovať subklinickú formu paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie bez klinických príznakov. Použitie multiparametrického hradlovania CD71+ buniek umožňuje vylúčiť z analýzy debris, dublety a nešpecificky viazané monoklonálne protilátky. 1 chorý.

Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je závažná získaná patológia skupiny hemolytickej anémie. Markiafava-Mikeliho choroba alebo Strübing-Marchiafawa choroba, iné názvy pre túto patológiu, spôsobuje deštrukciu červených krviniek. Choroba je veľmi zriedkavá, pre 500 tisíc obyvateľov sa s touto patológiou môže stretnúť 1 osoba.

Aby ste sa nestarali o vývoj možných komplikácií a následkov patológie, mali by ste vedieť, aká je diagnóza paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie, príznaky a liečba patológie.

Príčiny hemoglobinúrie

Ako už bolo uvedené vyššie, paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je veľmi zriedkavé ochorenie, navyše sa patológia najčastejšie vyskytuje u ľudí vo veku 20 až 40 rokov. Prípady rozvoja ochorenia v starobe alebo u detí sú známe aj lekárskej praxi, tvoria však zanedbateľné percento.

Predpokladá sa, že príčinou paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie (PNH) je mutačná reakcia génu kmeňových buniek (PIG-A), ktorý je súčasťou chromozómu X v kostnej dreni, v reakcii na vystavenie nedefinovaným ovplyvňujúcim faktorom. Niektoré zdroje tvrdia, že príčiny, ktoré spôsobujú mutáciu génu, nie sú známe.

Iní tvrdia, že hemoglobinúria sa môže vyvinúť na pozadí infekčných ochorení, zápalu pľúc, zranení, intoxikácie, hypotermie a popálenín a dokonca aj ťažkej fyzickej námahy.

Jednomyseľný názor na etiológiu patológie však ešte nebol stanovený.

Bola odhalená jasná súvislosť medzi vývojom diagnózy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie ako symptómu sprievodných patológií. Lekárske štúdie ukázali, že PNH sa v 30 % prípadov vyvíja v dôsledku aplastickej anémie a iných patológií cievneho systému.

Známym argumentom je, že aj jediná zmutovaná bunka môže viesť k rozvoju ťažkej formy patologického stavu. Pri tvorbe červených krviniek, ktorá sa uskutočňuje v kostnej dreni, sa kmeňové bunky delia, dozrievajú a uvoľňujú sa do krvného obehu. Jeden modifikovaný gén sa rozdelí na ďalší pár a tie na ďalší pár atď. To znamená, že jedna bunka sa sama rozmnoží a postupne naplní krv poškodenými červenými krvinkami.

Podstata poškodenia erytrocytov spočíva v neúplnej alebo chýbajúcej bielkovinovej membráne, ktorá slúži na ochranu buniek pred imunitným systémom. Pri najmenšom defekte v bunke ju imunita tela zničí, v dôsledku čoho sa takáto diagnóza vyvinie ako hemolýza - intravaskulárna deštrukcia červených krviniek, ktorá sa vyznačuje uvoľňovaním čistého hemoglobínu do krvi.

Rovnaký proces sa vyskytuje pri chronickej hemolytickej anémii, takže paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je jej analógom alebo, ako často hovoria praktici, jej akútnou získanou formou. Hlavným a jediným rozdielom medzi týmito patológiami je princíp ich vývoja.

Hemolytická anémia je vrodená patológia, získa sa hemoglobinúria. Defekt erytrocytov sa môže rozšíriť aj na iné pevné prvky cievnej tekutiny: leukocyty a krvné doštičky.

Príznaky nočnej hemoglobinúrie

Symptómy Markjafava-Micheliho choroby závisia od kauzálnej klasifikácie patológie. Ako sa zistilo, ochorenie môže byť nezávislé, podľa toho sa rozlišuje idiopatická forma PNH. V dôsledku vývoja patológie na pozadí aplastickej anémie má paroxyzmálna nočná hemoglobinúria formu syndrómu. Najvzácnejšia je idiomatická forma PNH, ktorá sa vyskytuje na pozadí hematopoetickej hypoplázie.

Nie je možné vyčleniť zreteľné symptómy pre ktorúkoľvek z foriem ochorenia, pretože je veľmi variabilná. Priebeh ochorenia môže byť navonok asymptomatický, v tomto prípade možno patológiu zistiť iba laboratórnou diagnostikou. Ďalší pacienti majú ťažký anemický syndróm.

Vo všeobecnosti je možné určiť malé zovšeobecnenie všetkých možných prejavov nočnej hemoglobúrie, čím sa zvýrazní hlavný symptomatický obraz.

• Proces hemolýzy (deštrukcia červených krviniek a hemoglobínu) sa vyskytuje hlavne v noci (nočná hemoglobinúria), preto pri rannom močení nadobudne farba moču tmavohnedý odtieň. Vo dne a večer sa takéto znamenie nepozoruje.
• V dôsledku kvantitatívneho poklesu erytrocytov v krvi sa pozoruje anemický syndróm. Jeho prejavy priamo súvisia s kyslíkovým hladovaním orgánov a tkanív. Preto môže pacient pociťovať bolesti hlavy, závraty, blikajúce čierne bodky pred očami, celkovú slabosť, únavu, záchvaty angíny pectoris a tachykardiu.

• V prípade sprievodných infekčných ochorení, krvácania, fyzickej námahy a pod. sa môže vyvinúť hemolytická kríza, ktorá sa prejavuje prudkým skokom v množstve hemoglobínu v cievnej tekutine, ako aj ťažkou malátnosťou, horúčkou, bolesťami kostí, môže sa objaviť zožltnutie kože a stredne závažná splenomegália (zväčšenie sleziny).
• Hemoglobinúria je sprevádzaná porušením koncentrácie oxidu dusnatého v plazme, ktorá tak na pozadí kríz, ako aj pri ťažkej patológii spôsobuje erektilnú dysfunkciu u mužov.
• V dôsledku vzniknutého defektu krvných doštičiek (krvných buniek zodpovedných za zrážanie krvi) môže dôjsť k trombóze, ktorá sa najčastejšie pozoruje v žilách. Rovnaký proces môže vyvolať látku, ktorá sa uvoľňuje počas deštrukcie pevných krviniek. Spôsobuje zvýšenú zrážanlivosť cievnej tekutiny, od ktorej závisí sklon k trombóze. Takéto porušenia môžu viesť k smrti.

Najvýraznejšie symptómy paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie možno získať laboratórnou diagnostikou. Štúdie ukážu hladinu hemoglobínu v krvi, stav buniek, prítomnosť trombopénie a leukopénie, hladinu železa a iných stopových prvkov atď. Úplná a presná diagnóza hemoglobinúrie trvá dlho, keďže toto ochorenie môžu byť starostlivo skryté pod rúškom iných patológií.

Preto najracionálnejším spôsobom, ako včas odhaliť Markyafava-Mikeliho chorobu, bude pravidelné preventívne vyšetrenie.

Liečba paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie

Obdobie detekcie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie určuje potrebné terapeutické metódy a stanovuje prognózu výsledku patológie, ktorá je vo väčšine prípadov nepriaznivá. Je to spôsobené nedostatkom konkrétnej príčiny vývoja a nemožnosťou jej odstránenia. Preto neexistuje žiadna špecifická liečba PNH.

Všetky terapeutické opatrenia sú zamerané na elimináciu symptomatických prejavov. Jediný účinný spôsob, ako sa úplne zbaviť zmutovaných buniek, je transplantácia červenej kostnej drene (miesto, kde sa tvoria krvinky).

S rozvojom hemolytickej krízy, akútnej formy hemolýzy, je pacientovi predpísané viacnásobné transfúzie červených krviniek. Takýchto transfúzií môže byť 5 alebo viac. Počet procedúr a ich frekvencia sa zisťuje opakovanými analýzami a vykonáva sa pri ďalšej reprodukcii defektných erytrocytov.

V zriedkavých prípadoch sa slezina odstráni. Známky vedúce k splenektómii sú prudké zvýšenie orgánu a prejav rozvoja srdcového infarktu.

Zvyšok terapeutických opatrení spočíva v užívaní liekov rôznych skupín, ktoré zmierňujú priebeh patológie. Hlavnými liekmi sú prípravky skupín steroidných hormónov, cytostatiká, ako aj prípravky železa a kyseliny listovej.

Nerobol

Najbežnejším predpisom pre lekárov na boj proti symptomatickej manifestácii paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie je liek Nerobol. Ide o hormonálny liek zo skupiny anabolických steroidov. Účinok lieku je zameraný:

• stimulovať syntézu proteínov v tele pacienta, čo nestačí v defektnej membráne erytrocytov;
• má priaznivý vplyv na metabolizmus dusíka;
• oneskoruje stiahnutie draslíka, síry a fosforu, ktoré sú potrebné pre normálnu syntézu bielkovín;
• vyvoláva zvýšenú fixáciu vápnika v kostiach.

Po užití tohto lieku pacient pociťuje zvýšenie chuti do jedla, intenzívny nárast svalovej hmoty, zrýchlenie kalcifikácie kostí, ako aj oveľa lepší celkový stav tela.

Užívanie lieku začína 10 g, postupne sa zvyšuje na 30 g, 1-2 dávky denne. Pre deti je dávka lieku 1 tableta každý druhý deň, s ťažkou formou, denne. Kurz terapie Nerobolom je od 2 do 3 mesiacov.

Po ukončení užívania lieku u mnohých pacientov dochádza k zvýšeniu hemolýzy.

Použitie Nerobolu sa môže vykonávať prísne podľa predpisu ošetrujúceho lekára.

heparín

Heparín je priamy antikoagulant - prostriedok na inhibíciu zrážania krvi. Pri paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii je predpísaná prevencia trombózy, ktorá komplikuje priebeh ochorenia.

Dávkovanie a frekvencia podávania je úplne individuálna v závislosti od zložitosti patológie a rizika vzniku krvných zrazenín v cievach.

Na konci kurzu Heparín lekár predpisuje nepriame antikoagulanciá na udržanie normálnej hladiny zrážanlivosti.

Eculizumab je liek, ktorý pozostáva z humanizovaných monokanálových protilátok. Princípom účinku lieku je zastaviť intravaskulárnu hemolýzu a priamo odolávať komplimentu krvi. V dôsledku toho sa zastaví prirodzená deštrukcia defektných červených krviniek imunitným systémom tela.

Tento liek je najdrahší liek na svete. Jeho mechanizmus účinku a vývoj možných dôsledkov aplikácie neboli dostatočne preštudované.

Prípravky železa a kyseliny listovej

Pri poruchách v práci červenej kostnej drene je nedostatok železa a kyseliny listovej, ktoré sú potrebné pre normálnu hematopoézu. Terapeutická terapia PNH zahŕňa užívanie prípravkov z týchto mikroelementov na kompenzáciu patologických strát.

Dávkovanie a spôsob užívania lieku určuje ošetrujúci lekár. Najčastejšie sa predpisujú Sorbifer, Tardiferron, Ferretab, Fenyuls atď.. Tieto lieky zahŕňajú komplex mikroelementov potrebných na normálnu tvorbu pevných krvných častíc v červenej kostnej dreni.

Podpora pečene

Posilnená terapia v boji proti paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii silne ovplyvňuje pečeň. Pri absencii podpornej liečby pečene môže jednoducho odmietnuť. Preto je dôležité užívať hepatoprotektívne lieky. Môžu to byť tieto lieky:

• Maksar;
• heptral;
• Karsil.

Okrem toho existuje množstvo produktov, ktoré pomáhajú obnoviť pečeňové bunky. Patria sem tekvica, sušené marhule, kel, olivový olej, mliečne výrobky a ďalšie. Hlavnou vecou nie je zhoršiť to nezdravým jedlom vo chvíľach slabosti pečene.

Po identifikácii choroby lekári dávajú nepresné predpovede. Štatistiky hovoria, že po stanovení diagnózy môže pacient žiť na udržiavacej terapii približne 5 rokov.

Vzhľadom na neznámy pôvod ochorenia a nepresnosti v príčinách jeho vývoja nie je možné zabrániť paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrii.

závery

Markjafava-Micheliho choroba alebo paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je závažné ochorenie, ktoré je aj pri intenzívnej starostlivosti smrteľné. Jedinou možnou obnovou je transplantácia červenej kostnej drene, v ktorej sa tvoria krvinky. Okrem toho patológia znamená vývoj sprievodných ochorení, ktoré nie sú menej nebezpečné pre stav pacienta.

Preto lekári jednomyseľne vyhlasujú, že najlepším spôsobom, ako zabrániť akejkoľvek patológii, je pravidelne absolvovať kompletné lekárske vyšetrenie. Možno, ak je choroba len v štádiu formovania, môže byť natrvalo odstránená. Pri takýchto závažných ochoreniach je hlavným problémom čas. Mali by ste sa starať o seba a svoje telo.