PNG ในทางการแพทย์คืออะไร? โรคโลหิตจาง, พยาธิวิทยาของการห้ามเลือด, เนื้องอกวิทยา

Catad_tema โรคเลือด - บทความ

ไอซีดี 10: D61.1, D61.2, D61.3, D61.8, D61.9

ปีที่อนุมัติ (ความถี่ในการแก้ไข): 2557 (ทบทวนทุก 2 ปี)

รหัส: KR121

สมาคมวิชาชีพ:

• สมาคมโลหิตวิทยาแห่งชาติ

ที่ได้รับการอนุมัติ

สมาคมโลหิตวิทยาแห่งรัสเซีย

ตกลง

สภาวิทยาศาสตร์กระทรวงสาธารณสุขแห่งสหพันธรัฐรัสเซีย__ __________201_

เกณฑ์คุณภาพ

ระดับของหลักฐาน

มาตรการวินิจฉัย

ทำการตรวจเลือดทางคลินิกขั้นสูง

ทำการศึกษาทางสัณฐานวิทยาและไซโตเคมีของการเตรียมไขกระดูก

ทำการศึกษาทางเซลล์พันธุศาสตร์ของเซลล์ไขกระดูก

ทำการศึกษาทางสัณฐานวิทยา (เนื้อเยื่อวิทยา) ของการเตรียมไขกระดูก

ทำการเอ็กซเรย์หน้าอกและ/หรือเอกซเรย์คอมพิวเตอร์ของหน้าอกและสมอง

เกณฑ์คุณภาพตามเหตุการณ์ (ความหมาย เนื้อหา กระบวนการ)

ทำการศึกษาทางสัณฐานวิทยาและ/หรือเนื้อเยื่อวิทยา และ/หรือมาตรฐานทางเซลล์พันธุศาสตร์ของตัวอย่างไขกระดูก

ดำเนินการบำบัดภูมิคุ้มกันแบบผสมผสาน (ในกรณีที่ไม่มีข้อห้าม)

ทำการพิมพ์ HLA ของพี่น้อง

ดำเนินการให้คำปรึกษาที่ศูนย์ปลูกถ่ายภายใน 3 เดือนนับจากวินาทีที่มีการพิจารณาหลักสูตรวัสดุทนไฟ

เกณฑ์การประเมินคุณภาพชั่วคราว

การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันจะดำเนินการภายใน 1 เดือนหลังจากการยืนยันการวินิจฉัยทางเนื้อเยื่อวิทยาและ/หรือทางไซโตจีเนติกส์ (ในกรณีที่ไม่มีข้อห้ามทางการแพทย์)

ประเมินพารามิเตอร์ทางคลินิกและทางโลหิตวิทยาในระหว่างการรักษาอย่างน้อย 2 ครั้งต่อสัปดาห์ จนกว่าจะได้รับการตอบสนองทางโลหิตวิทยาโดยสมบูรณ์

การศึกษาทางสัณฐานวิทยาของการเตรียมไขกระดูกดำเนินการด้วยการประเมินการสร้างเม็ดเลือดจากไขกระดูกหลังจากเสร็จสิ้นโปรแกรมการบำบัด

มีการศึกษาทางเซลล์พันธุศาสตร์มาตรฐานของการเตรียมไขกระดูก (การศึกษาอย่างน้อย 20 เมตาเฟส) และ/หรือการศึกษาไขกระดูกโดยใช้ฟลูออเรสเซนต์ไฮบริไดเซชัน (ในกรณีที่การศึกษาทางเซลล์พันธุศาสตร์ไม่ได้ให้ข้อมูลเพื่อระบุลักษณะความผิดปกติของกลุ่มอาการไมอีโลดิสพลาสติก)

โคลนของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal ถูกกำหนดโดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรีที่มีความไวสูงทุกๆ 6-12 เดือน โดยประเมินสัญญาณทางคลินิกและทางห้องปฏิบัติการของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก

การศึกษาทางสัณฐานวิทยาและ/หรือเนื้อเยื่อวิทยา และ/หรือมาตรฐานทางไซโตเจเนติกส์ได้ดำเนินการก่อนขั้นตอนต่อไปของการรักษา

มีการดำเนินการซ้ำของ antithymocyte globulin และการพิมพ์ HLA (เพื่อตรวจสอบความพร้อมของผู้บริจาคไขกระดูก allogeneic ในกรณีที่ไม่มีการตอบสนองหลังจาก 3-6 เดือน)

บรรณานุกรม

1. Kokhno A.V., Pimenova M.A., Parovichnikova E.N., Domracheva E.V. เอส.วี.จี. การตรวจหาความผิดปกติของคาริโอไทป์ที่ซ่อนอยู่ในกลุ่มอาการ myelodysplastic / S. V. G. Kokhno A.V., Pimenova M.A., Parovichnikova E.N., Domracheva E.V. // โลหิตวิทยาและการถ่ายเลือด – 2014. – ต. 59 – ฉบับที่ 1 – 25–28 หน้า

1. Kulagin A.D. โรคโลหิตจาง Aplastic / Kulagin A.D. / เอ็ด เค.วี.เอ. ลิซูคอฟ ไอ.เอ. – – โนโวซีบีร์สค์: Nauka, 2008. ฉบับที่. วิทยาศาสตร์.
2. มิคาอิโลวา อี.เอ. โปรโตคอลสำหรับการรักษาผู้ป่วยโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ: การบำบัดด้วยการกดภูมิคุ้มกันแบบผสมผสาน / ed. วี.จี.ซาฟเชนโก้. มอสโก: แพรคติกา, 2012. – 135–150 หน้า.
3. เอ็ม.จี.ผู้น่ารัก วิวัฒนาการของโคลนอลในโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ / M. G. Afable, R. V Tiu, J. P. Maciejewski // โลหิตวิทยา Am. สังคมสงเคราะห์ เฮมาทอล การศึกษา โปรแกรม – 2554 – ต. 2554 – 90–5 น.
4. Bacigalupo A. กลยุทธ์การรักษาผู้ป่วยโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่ออย่างรุนแรง / A. Bacigalupo // การปลูกถ่ายไขกระดูก. – 2008 – ต. 42 Suppl 1 – หมายเลข SUPPL.1 – S42–S44с
5. โบโรวิทซ์ เอ็ม.เจ. แนวทางการวินิจฉัยและติดตามภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal และความผิดปกติที่เกี่ยวข้องโดยโฟลว์ไซโตเมทรี / M. J. Borowitz, F. E. Craig, J. A. Digiuseppe, A. J. Illingworth, W. Rosse, D. R. Sutherland, C. T. Wittwer, S. J. Richards // Cytometry B. Clin. ไซทอม – 2010 – ต. 78 – ฉบับที่ 4 – 211–30 น.
6. Kulagin A. ค่าพยากรณ์ของการมีอยู่ของโคลนฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ในผู้ป่วยโรคโลหิตจาง aplastic ที่ได้รับการรักษาด้วยภูมิคุ้มกันรวม: ผลลัพธ์ของการศึกษาในอนาคตแบบสองศูนย์ / A. Kulagin, I. Lisukov, M. Ivanova, I. Golubovskaya, I. Kruchkova, S. Bondarenko, V. Vavilov, N. Stancheva, E. Babenko, A. Sipol, N. Pronkina, V. Kozlov, B. Afanasyev // Br. เจ.เฮมาทอล. – 2014. – ต. 164 – ฉบับที่ 4 – 546–554 น.
7. มาร์ช เจ.ซี.ดับบลิว. แนวทางการวินิจฉัยและการจัดการโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ / J. C. W. Marsh, S. E. Ball, J. Cavenagh, P. Darbyshire, I. Dokal, E. C. Gordon-Smith, J. Keidan, A. Laurie, A. Martin, J. Mercieca, S. B. Killick, R. Stewart, J. A. L. Yin // Br. เจ.เฮมาทอล. – 2552 – ต. 147 – ฉบับที่ 1 – 43–70 น.
8. มาร์ช เจ.ซี.ดับบลิว. แนวทางการวินิจฉัยและการรักษาโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ / เจ.ซี. ดับเบิลยู. มาร์ช, เอส. อี. บอล, เจ. คาเวนาห์, พี. ดาร์บีเชียร์, ไอ. โดคาล, อี. ซี. กอร์ดอน-สมิธ, เจ. ไคแดน, เอ. ลอรี, เอ. มาร์ติน, เจ. เมอร์ซีกา, เอส. บี. คิลลิค, อาร์. สจ๊วต, เจ. เอ. แอล. หยิน / /br. เจ.เฮมาทอล. – 2552 – ต. 147 – ฉบับที่ 1 – 43–70 น.
9. มาร์ช เจ.ซี.ดับบลิว. การจัดการผู้ป่วยโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อแบบทนไฟ: มีทางเลือกอะไรบ้าง? เจ.ซี.ดับบลิว. มาร์ช เอ.จี. กุลเสการาราช – 2014. – ต. 122 – 3561–3567 หน้า
10. Scheinberg P. Horse antithymocyte globulin เป็นการบำบัดด้วยการกอบกู้หลังจากกระต่าย antithymocyte globulin สำหรับโรคโลหิตจาง aplastic รุนแรง / P. Scheinberg, D. Townsley, B. Dumitriu, P. Scheinberg, B. Weinstein, O. Rios, C. O. Wu, N. S. Young // Am . เจ. ฮีมาทอล. – 2014 – ต. 89 – ฉบับที่ 5 – 467–469 หน้า
11. Scheinberg P. ฉันจะรักษาภาวะโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อได้อย่างไร / P. Scheinberg, N. S. Young // Blood – 2012. – T. 120 – หมายเลข 6 – 1185–96 หน้า
12. หนุ่ม NS ระบาดวิทยาของโรคโลหิตจางจากไขกระดูก // ไขกระดูกล้มเหลว กลุ่มอาการ – 1–46 วินาที
13. หนุ่ม NS ปัญหาของการเป็นโคลนนิ่งในโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ: ปริศนาของดร. ดาเมเชค พักแล้ว // เลือด – 1992. – ต. 79. – ลำดับ 6. – 1385–1392 น.
14. หนุ่ม NS กลไกทางพยาธิสรีรวิทยาในโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ // โลหิตวิทยา น. สังคมสงเคราะห์ เฮมาทอล การศึกษา โปรแกรม. – 2549. – 72–77 น.
15. หนุ่ม NS ความสัมพันธ์ของโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อและ PNH //อินท. เจ. ฮีมาทอล. – พ.ศ. 2545 – ต. 76 อุปทาน 2. – 168–172 น.
16. Zeng Y. พยาธิสรีรวิทยาที่ซับซ้อนของโรคโลหิตจางจากไขกระดูกที่ได้มา / Y. Zeng, E. Katsanis // คลินิก. ประสบการณ์ อิมมูนอล. – 2015. – ต. 180 – ฉบับที่ 3 – 361–70 น.
17. Vinogradova M.A. ภาวะแทรกซ้อนติดเชื้อในผู้ป่วยโรคโลหิตจาง aplastic / Vinogradova M.A. – มอสโก: วิทยานิพนธ์ระดับผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์ / สถาบันของรัฐ "ศูนย์วิจัยทางโลหิตวิทยาของ Russian Academy of Medical Sciences", 2552

ภาคผนวก A1 องค์ประกอบของคณะทำงาน

Voitsekhovsky V.V.แพทย์ Blagoveshchensk

โวปิลินา เอ็น.เอ.โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาค GBUZ Tambov ตั้งชื่อตาม V.D.Babenko", ตัมบอฟ

กาโปโนวา ที.วี.ผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์รองผู้อำนวยการสถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิทยาศาสตร์โลหิตวิทยากระทรวงสาธารณสุขแห่งรัสเซียกรุงมอสโก

Golubeva M.E.- "ศูนย์โลหิตวิทยาเมือง" ที่สถาบันดูแลสุขภาพงบประมาณเทศบาล "GKP หมายเลข 5" ระดับการใช้งาน

คาปอร์สกายา ที.เอส.ผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์, หัวหน้าภาควิชาโลหิตวิทยา, Irkutsk Order of the Badge of Honor Regional Clinical Hospital, Irkutsk,

Klyasova G.A.วิทยาศาสตรดุษฎีบัณฑิต, ศาสตราจารย์, หัวหน้าห้องปฏิบัติการวิทยาศาสตร์และคลินิกจุลชีววิทยา, สถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิจัยโลหิตวิทยาของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

คอนสแตนติโนวา ที.เอส.หัวหน้าภาควิชาโลหิตวิทยา, ศูนย์โลหิตวิทยาภูมิภาค, โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาค Sverdlovsk หมายเลข 1, Yekaterinburg,

กุลจิน อ.วิทยาศาสตรดุษฎีบัณฑิต, รองหัวหน้าแพทย์ที่คลินิกของสถาบันการศึกษางบประมาณของรัฐสำหรับการศึกษาวิชาชีพขั้นสูง "มหาวิทยาลัยการแพทย์แห่งรัฐเซนต์ปีเตอร์สเบิร์กตั้งชื่อตาม ศึกษา ไอ.พี. Pavlov" กระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, สถาบันวิจัยโลหิตวิทยาในเด็กและการปลูกถ่ายอวัยวะแห่งเซนต์ปีเตอร์สเบิร์กตั้งชื่อตาม อาร์.เอ็ม.กอร์บาเชวา

ลาแปง วี.เอ.ผู้สมัครวิทยาศาสตร์การแพทย์, หัวหน้าภาควิชาโลหิตวิทยา, โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาค Yaroslavl, Yaroslavl

มิคาอิโลวา อี.เอ.วิทยาศาสตรดุษฎีบัณฑิต, ศาสตราจารย์, นักวิจัยชั้นนำของภาควิชาเคมีบำบัดสำหรับมะเร็งทางโลหิตวิทยาและภาวะซึมเศร้าของเม็ดเลือด, สถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิทยาศาสตร์โลหิตวิทยาของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

Parovichnikova E.N.วิทยาศาสตรดุษฎีบัณฑิต, หัวหน้าภาควิชาวิทยาศาสตร์และคลินิกเคมีบำบัดโรคเม็ดเลือดแดงแตก, ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกและการปลูกถ่ายไขกระดูก, สถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิจัยโลหิตวิทยาของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

โพลสคิค M.A. GBUZ PC "โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาคระดับการใช้งาน" ระดับการใช้งาน

ซาฟเชนโก้ วี.จี.นักวิชาการ, วิทยาศาสตรดุษฎีบัณฑิต, ศาสตราจารย์, ผู้อำนวยการทั่วไปของศูนย์วิจัยโลหิตวิทยาสถาบันงบประมาณแห่งรัฐของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

Samoilova O.S.ผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์ หัวหน้าภาควิชาโลหิตวิทยา Nizhny Novgorod Region โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาค Nizhny Novgorod เอ็น.เอ. เซมาชโก, นิซนี นอฟโกรอด

สคริปคิน่า เอ็นเอสนักโลหิตวิทยา GAUZ JSC "โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาคอามูร์", บลาโกเวชเชนสค์,

ทิคูโนวา ที.เอส. OGBUZ "โรงพยาบาลคลินิกภูมิภาคเบลโกรอดแห่งเซนต์ Joasaph", เบลโกรอด

Troitskaya V.V.ผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์, หัวหน้าภาควิชาวิทยาศาสตร์และคลินิกเคมีบำบัดของมะเร็งทางโลหิตวิทยาและภาวะซึมเศร้าของเม็ดเลือด, สถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิจัยทางโลหิตวิทยาของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

อุสติโนวา อี.เอ็น.ผู้สมัครสาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์, นักวิจัยจากภาควิชาเคมีบำบัดสำหรับมะเร็งทางโลหิตวิทยาและภาวะซึมเศร้าของเม็ดเลือด, สถาบันงบประมาณของรัฐบาลกลางศูนย์วิจัยโลหิตวิทยาของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย, มอสโก,

ชาโกโรวา ที.วี. GBUZ "ร้านขายยามะเร็งวิทยาระดับภูมิภาค", Penza

ผู้เชี่ยวชาญด้านโลหิตวิทยา

ผู้เชี่ยวชาญด้านเนื้องอกวิทยา

นักบำบัดผู้เชี่ยวชาญ

วิธีการรวบรวมหลักฐาน

วิธีที่ใช้ในการรวบรวม/คัดเลือกหลักฐาน: สืบค้นฐานข้อมูลอิเล็กทรอนิกส์

คำอธิบายของวิธีการที่ใช้ในการรวบรวม/เลือกหลักฐาน: ฐานหลักฐานสำหรับคำแนะนำคือสิ่งตีพิมพ์ที่รวมอยู่ใน Cochrane Library, ฐานข้อมูล EMBASE และ MEDLINE ความลึกของการค้นหาคือ 10 ปี

วิธีที่ใช้ในการประเมินคุณภาพและความแข็งแกร่งของหลักฐาน:

ฉันทามติของผู้เชี่ยวชาญ

วิธีที่ใช้ในการวิเคราะห์หลักฐาน:

การทบทวนอย่างเป็นระบบพร้อมตารางหลักฐาน

คำอธิบายวิธีการที่ใช้ในการวิเคราะห์หลักฐาน:

เมื่อเลือกสิ่งตีพิมพ์เป็นแหล่งที่มาของหลักฐานที่เป็นไปได้ จะมีการตรวจสอบวิธีการที่ใช้ในการศึกษาแต่ละครั้งเพื่อให้แน่ใจว่ามีความถูกต้อง ผลลัพธ์ของการศึกษามีอิทธิพลต่อระดับของหลักฐานที่กำหนดให้กับสิ่งพิมพ์ ซึ่งจะส่งผลต่อความแข็งแกร่งของข้อเสนอแนะที่เป็นผลจากการวิจัย

การตรวจสอบระเบียบวิธีจะขึ้นอยู่กับคำถามสำคัญหลายข้อที่มุ่งเน้นไปที่คุณลักษณะของการออกแบบการศึกษาที่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อความถูกต้องของผลลัพธ์และข้อสรุป

กระบวนการประเมินอาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยเชิงอัตวิสัยอย่างไม่ต้องสงสัย เพื่อลดอคติที่อาจเกิดขึ้น การศึกษาแต่ละชิ้นได้รับการประเมินอย่างเป็นอิสระ เช่น สมาชิกอิสระของคณะทำงานอย่างน้อยสองคน ทั้งกลุ่มจะหารือเกี่ยวกับความแตกต่างในการประเมินโดยรวม หากเป็นไปไม่ได้ที่จะบรรลุฉันทามติ ก็มีผู้เชี่ยวชาญอิสระเข้ามาเกี่ยวข้อง

ตารางหลักฐาน:

ตารางหลักฐานเสร็จสมบูรณ์โดยสมาชิกของคณะทำงาน

วิธีการที่ใช้ในการกำหนดคำแนะนำ:

ฉันทามติของผู้เชี่ยวชาญ

คะแนนแนวปฏิบัติที่ดี (GPP):

การวิเคราะห์ทางเศรษฐกิจ:

ไม่มีการวิเคราะห์ต้นทุนและไม่มีการตรวจสอบสิ่งพิมพ์ทางเภสัชเศรษฐศาสตร์

การประเมินผู้เชี่ยวชาญภายนอก

การประเมินผู้เชี่ยวชาญภายใน

คำแนะนำฉบับร่างเหล่านี้ได้รับการตรวจสอบโดยผู้ทรงคุณวุฒิโดยผู้เชี่ยวชาญอิสระ ซึ่งถูกขอให้แสดงความคิดเห็นในเบื้องต้นเกี่ยวกับขอบเขตของการตีความหลักฐานที่เป็นรากฐานของคำแนะนำนั้นชัดเจน

ได้รับความคิดเห็นจากแพทย์ปฐมภูมิและนักบำบัดในท้องถิ่นเกี่ยวกับความชัดเจนของคำแนะนำและการประเมินความสำคัญของคำแนะนำในฐานะเครื่องมือในการทำงานในชีวิตประจำวัน

เวอร์ชันเบื้องต้นยังถูกส่งไปยังผู้ตรวจสอบที่ไม่ใช่ทางการแพทย์เพื่อขอความคิดเห็นจากมุมมองของผู้ป่วย

เนื้อหานำเสนอจากหนังสือเรียน RUDN

โรคโลหิตจาง คลินิกการวินิจฉัยและการรักษา / Stuklov N.I. , Alpidovsky V.K. , Ogurtsov P.P. – อ.: Medical Information Agency LLC, 2013. – 264 หน้า

การคัดลอกและทำซ้ำเนื้อหาโดยไม่ระบุผู้เขียนเป็นสิ่งต้องห้ามและมีโทษตามกฎหมาย

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) เป็นโรคโลหิตจางที่เกิดจากเม็ดเลือดแดงแตกแบบ clonal ซึ่งสัมพันธ์กับข้อบกพร่องในเยื่อหุ้มเซลล์เม็ดเลือด ดังนั้นโรคนี้จึงจัดอยู่ในกลุ่มของเยื่อหุ้มเซลล์และเป็นโรคเยื่อหุ้มเซลล์เพียงชนิดเดียวที่ได้มาในกลุ่มโรคของกลุ่มนี้ การกลายพันธุ์ที่นำไปสู่ข้อบกพร่องของเมมเบรนใน PNH เกิดขึ้นที่ระดับของเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent และสาเหตุของการกลายพันธุ์ยังไม่ชัดเจน

PNH เกิดขึ้นที่ความถี่ 1:500,000 ของประชากร ผู้คนทุกกลุ่มอายุจะเจ็บป่วย แต่จะบ่อยขึ้นในช่วงอายุ 30 – 40 ปี ผู้ชายและผู้หญิงป่วยบ่อยพอๆ กัน

สาเหตุและการเกิดโรค

การกลายพันธุ์ของยีนจุดพีก้า บนโครโมโซมคู่ที่ 22 หรือโครโมโซม X ของเซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ (PSC) ทำให้เกิดการหยุดชะงักของการสร้างกรดฟอสฟาติดิลโนลินิกและโปรตีนบนผิวเซลล์เม็ดเลือดซีดี 55 และซีดี 59 สร้างระบบในเซลล์ปกติที่ปิดกั้นผลเสียหายต่อเมมเบรนของแอคทิเวตคอมพลิเมนต์เนื่องจากการก่อตัวของน้ำตกซีดี 5b –9 – สารเชิงซ้อนที่ส่งผลต่อโปรตีโอไลต์ของเยื่อหุ้มเซลล์

ดังนั้นการไม่มีปัจจัยบนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดที่รบกวนการทำงานของส่วนประกอบทำให้เกิดการสลายของเม็ดเลือดแดงนิวโทรฟิลและเกล็ดเลือดที่บกพร่อง

ด้วย PNH มีโคลนในเลือดของผู้ป่วยสองโคลน: ปกติและพยาธิวิทยา และภาพทางคลินิกและความรุนแรงของโรคส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับอัตราส่วนของโคลนเหล่านี้

คลินิก

การกระทำของโปรตีโอไลติกของส่วนประกอบเสริมที่เปิดใช้งานจะนำไปสู่การทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีข้อบกพร่องในหลอดเลือดซึ่งแสดงออกเอง ฮีโมโกลบินนูเรีย- การเปิดใช้งานส่วนประกอบเสริมเกิดขึ้นในเวลากลางคืนระหว่างการนอนหลับ เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของ pH ไปทางด้านที่เป็นกรด

ในทางคลินิก ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในระหว่างการนอนหลับจะแสดงออกโดยการปล่อยปัสสาวะสีดำในระหว่างการขับปัสสาวะตอนเช้า อาการวิงเวียนศีรษะ อาการวิงเวียนศีรษะ และการปรากฏตัวของความเหลืองของตาขาว นอกจากนี้ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกสามารถกระตุ้นได้จากโรคติดเชื้อและยาบางชนิด

นอกจากอาการโลหิตจางที่เกี่ยวข้องกับภาวะเม็ดเลือดแดงแตกแล้ว PNH ยังมีบทบาทสำคัญในคลินิกอีกด้วย ภาวะแทรกซ้อนจากลิ่มเลือดอุดตันเกิดจากการปล่อย thromboplastin และเอนไซม์ที่ออกฤทธิ์จำนวนหนึ่งจากเซลล์ที่ถูกทำลาย

บ่อยครั้งที่ข้อร้องเรียนแรก ๆ ของผู้ป่วยคืออาการปวดท้องซึ่งเป็นการจำลองโรคทางช่องท้องเฉียบพลันต่างๆ อาการปวดท้องสัมพันธ์กับการเกิดลิ่มเลือดในหลอดเลือดแดงมีเซนเทอริกขนาดเล็ก

โรคลิ่มเลือดอุดตันเกิดขึ้นในผู้ป่วย PNH 12% และสามารถเกิดขึ้นได้หลายวิธี ในทางเลือกหนึ่ง เนื้อหาของผู้ป่วยที่อยู่นอกภาวะวิกฤตค่อนข้างน่าพอใจ HB – ประมาณ 80 – 90 กรัม/ลิตร ในผู้ป่วยรายอื่น วิกฤตเม็ดเลือดแดงแตกอย่างรุนแรงตามมาทีหลัง นำไปสู่ภาวะโลหิตจางขั้นรุนแรง มักเกิดภาวะแทรกซ้อนจากลิ่มเลือดอุดตันร่วมด้วย

ข้อมูลห้องปฏิบัติการ

ในช่วงวิกฤตเม็ดเลือดแดงแตก ระดับฮีโมโกลบินลดลงอย่างรวดเร็วเหลือ 20 กรัม/ลิตร หรือต่ำกว่า และจำนวนเซลล์เม็ดเลือดแดงลดลงแบบขนาน ในช่วงระยะเวลาให้อภัยเนื้อหา HB และเม็ดเลือดแดงเพิ่มขึ้นในบางกรณีถึงขีด จำกัด ล่างของปกติ ข้อบกพร่องในเยื่อหุ้มเม็ดเลือดแดงใน PNH ไม่เหมือนกับการเปลี่ยนแปลงรูปร่างของเม็ดเลือดแดงทางพยาธิวิทยา โรคโลหิตจางในกรณีส่วนใหญ่เป็นภาวะปกติและภาวะปกติในธรรมชาติ อย่างไรก็ตามด้วยการสูญเสียธาตุเหล็กในปัสสาวะอย่างมีนัยสำคัญ (อันเป็นผลมาจากฮีโมโกลบินนูเรียและฮีโมไซด์รินูเรีย) ทำให้เกิดภาวะ hypochromia ของเม็ดเลือดแดง เนื้อหาของ reticulocytes จะเพิ่มขึ้น แต่ในระดับที่น้อยกว่ามากในภาวะเยื่อหุ้มเซลล์ที่มีมา แต่กำเนิดที่มีความเข้มข้นของเม็ดเลือดแดงแตกใกล้เคียงกัน ไม่พบฮีโมโกลบินที่ผิดปกติและกิจกรรมของเอนไซม์ที่ลดลง (ยกเว้น acetylcholinesterase) ในเม็ดเลือดแดงใน PNH ความต้านทานออสโมติกของเม็ดเลือดแดงไม่เปลี่ยนแปลง เมื่อเม็ดเลือดแดงจากผู้ป่วยที่มี PNH ถูกบ่มภายใต้สภาวะปลอดเชื้อจะพบว่ามีการสลายตัวของเม็ดเลือดแดงอัตโนมัติมากกว่าปกติซึ่งจะไม่ลดลงเมื่อเติมกลูโคส

จำนวนเม็ดเลือดขาวในกรณีส่วนใหญ่จะลดลงเนื่องจากภาวะนิวโทรพีเนีย บางครั้งมีการเลื่อนไปทางซ้ายในมะเร็งเม็ดเลือดขาว

จำนวนเกล็ดเลือดก็มักจะต่ำเช่นกัน การทำงานของเกล็ดเลือดไม่ลดลง

เมื่อตรวจสอบไขกระดูกจะตรวจพบเม็ดเลือดแดงในเลือดสูงและสัญญาณของการขาดเม็ดเลือดแดงจากไขกระดูกในรูปแบบของการสุกของเซลล์เม็ดเลือดแดงและองค์ประกอบของแกรนูโลไซต์ที่บกพร่องรวมถึงการลดลงของจำนวนเมกะคาริโอไซต์ซึ่งมักจะมีการปักเกล็ดเลือดบกพร่อง ในผู้ป่วยบางรายที่มี PNH พร้อมด้วยสัญญาณของ dyshematopoiesis ตรวจพบไขกระดูก hypoplasia ซึ่งเป็นลักษณะของโรคโลหิตจาง aplastic

ในกรณีที่ตรวจพบเม็ดเลือดแดง PNH ที่ไวต่อส่วนประกอบและอาการของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือดถูกตรวจพบในผู้ป่วยที่มี aplasia ของเม็ดเลือดที่จัดตั้งขึ้นก่อนหน้านี้, การวินิจฉัยกลุ่มอาการ PNH ซึ่งพัฒนาขึ้นจากภูมิหลังของโรคโลหิตจาง aplastic

อย่างไรก็ตาม เราควรจำเกี่ยวกับกรณีที่เกิดขึ้นไม่บ่อยนักของ PNH ซึ่งจบลงด้วยภาวะโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ เนื่องจากการสูญเสียเม็ดเลือดในไขกระดูกเนื่องจากวิกฤตการณ์เม็ดเลือดแดงแตกอย่างรุนแรงและผลข้างเคียงอื่น ๆ (การติดเชื้อ ยาบางชนิด ฯลฯ)

สัญญาณทางห้องปฏิบัติการที่สำคัญของ PNH คือฮีโมโกลบินนูเรีย เนื้อหาของฮีโมโกลบินอิสระในพลาสมาเนื่องจากการทำลายเม็ดเลือดแดงในหลอดเลือดใน PNH ขึ้นอยู่กับความรุนแรงของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกอยู่ในช่วง 11 ถึง 280 มก.% (โดยมีบรรทัดฐานสูงถึง 4 มก.%)

ปริมาณบิลิรูบินมักจะเพิ่มขึ้นเล็กน้อย สาเหตุหลักมาจากเศษส่วนที่ไม่ถูกคอนจูเกต ระดับของธาตุเหล็กในซีรั่มใน PNH ขึ้นอยู่กับระยะของโรค: ในช่วงวิกฤตเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากการปล่อยธาตุเหล็กของฮีโมโกลบินเข้าสู่พลาสมาจะสังเกตภาวะเฟอร์ริติเนเมียและในช่วงเวลาที่เงียบสงบเนื่องจากการสูญเสียธาตุเหล็กในปัสสาวะ สังเกตภาวะ hypoferritinemia การขาดธาตุเหล็กใน PNH ตรงกันข้ามกับโรคโลหิตจางจากการขาดธาตุเหล็ก มาพร้อมกับความสามารถในการจับกับเหล็กทั้งหมดและแฝงที่ลดลงพร้อมกัน เห็นได้ชัดว่าเกิดจากการละเมิดการสังเคราะห์ Transferrin ในตับ

การตรวจปัสสาวะเผยให้เห็นฮีโมโกลบินนูเรียในผู้ป่วยส่วนใหญ่ที่มี PNH ด้วย PNH ฮีโมโกลบินจะปรากฏในปัสสาวะที่ความเข้มข้นค่อนข้างต่ำในพลาสมาซึ่งสัมพันธ์กับการลดลงของเนื้อหาของ haptoglobin ในพลาสมา ในระหว่างการขับฮีโมโกลบินออกทางไต ส่วนหนึ่งของเฮโมโกลบินจะถูกดูดซึมกลับเข้าไปและสะสมอยู่ในเยื่อบุผิวท่อในรูปของเฮโมซิเดริน ซึ่งจะถูกขับออกทางปัสสาวะ สิ่งที่น่าสนใจคือ hemosiderinuria ใน PNH สามารถตรวจพบได้บ่อยกว่า hemoglobinuria เนื่องจากมันจะพัฒนานอกวิกฤตเม็ดเลือดแดงด้วย

การวินิจฉัยโรคนี้เกี่ยวข้องกับการระบุภาพทางคลินิกที่มีลักษณะเฉพาะ สัญญาณทางห้องปฏิบัติการของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือด (ฮีโมโกลบินในเลือด (ซีรั่มในเลือดสีแดงหลังจากการปั่นแยก), haptoglobin ที่ลดลงในเลือด, บิลลิรูบินในเลือดทางอ้อมเล็กน้อย, LDH เพิ่มขึ้น, ฮีโมโกลบินนูเรีย, ฮีโมไซด์รินูเรีย) การวินิจฉัย PNH ขึ้นอยู่กับการตรวจหาลักษณะเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อส่วนประกอบของโรคนี้ เพื่อจุดประสงค์นี้พวกเขาจะถูกนำมาใช้ การทดสอบกรดเฮมาและละเอียดอ่อนมากขึ้น การทดสอบซูโครส.

เมื่อทำการทดสอบ Hem เซลล์เม็ดเลือดแดงที่กำลังทดสอบจะถูกบ่มในซีรั่มปกติที่มีความเป็นกรดถึง pH 6.4 ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ เฉพาะเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไวต่อส่วนประกอบเท่านั้นที่จะถูกสลาย ควรจำไว้ว่าเมื่อมีเซลล์เม็ดเลือดแดง PNH ในเลือดของผู้ป่วยต่ำและมีกิจกรรมเสริมในซีรั่มต่ำ การทดสอบ Hem จึงสามารถให้ผลลัพธ์เชิงลบได้

ความไวมากขึ้นคือการทดสอบซูโครส โดยจะมีการทดสอบเซลล์เม็ดเลือดแดงและซีรั่มปกติจำนวนเล็กน้อยในสารละลายไอโซโทนิกซูโครส ภายใต้สภาวะของแรงดันไฟฟ้าที่ลดลงในสภาพแวดล้อมซูโครส การตรึงส่วนเสริมที่แอคทีฟมากขึ้นบนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงและการสลายของเม็ดเลือดแดง PNH ที่ไวต่อส่วนเสริมจะเกิดขึ้น

หลักฐานของการมีอยู่ของโคลน PNH คือการตรวจพบบนเยื่อหุ้มเซลล์ของสัญญาณที่มีลักษณะเฉพาะของความเสียหายต่อยีน PIG A วิธีการสมัยใหม่ของโฟลไซโตเมทรีทำให้สามารถตรวจสอบการมีอยู่ของเม็ดเลือดแดงที่มีการขาดโมเลกุล CD59 ทั้งหมดหรือบางส่วนได้ อย่างไรก็ตามเมมเบรนไม่สามารถตรวจพบเม็ดเลือดแดงทางพยาธิวิทยาได้เสมอไปเนื่องจากมีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่เด่นชัด สิ่งที่น่าเชื่อถือที่สุดคือการศึกษา monocyte granulocytes เนื่องจากเซลล์ที่มีนิวเคลียสมีความอ่อนไหวต่อการกระทำของส่วนประกอบน้อยกว่า

การรักษา

เนื่องจากขาดแนวคิดที่ชัดเจนเกี่ยวกับการเกิดโรคของ PNH การรักษาโรคนี้จึงเป็นไปตามอาการในปัจจุบัน

เพื่อต่อสู้กับโรคโลหิตจางจะใช้การถ่ายเลือดทดแทนซึ่งความถี่ขึ้นอยู่กับความรุนแรงของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกและกิจกรรมชดเชยของไขกระดูก ควรจำไว้ว่าการถ่ายเลือดครบส่วนให้กับผู้ป่วยที่มี PNH มักจะมาพร้อมกับภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพิ่มขึ้น สาเหตุของปฏิกิริยานี้ไม่ชัดเจน ผู้ป่วยที่มี PNH ทนต่อการถ่ายเลือดครบส่วนหรือเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีระยะเวลาเก็บรักษานาน (มากกว่า 7-8 วัน) และการถ่ายเลือดล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ล้างแล้ว 3-5 เท่าโดยปราศจากเม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือด การใช้เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ถูกล้างเป็นวิธีการถ่ายเลือดที่ดีที่สุดในการรักษา PNH เมื่อปฏิกิริยาเกิดขึ้นกับเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ถูกล้างเนื่องจากการพัฒนาของไอโซเซนซิติเซชั่น การเลือกผู้บริจาครายบุคคลเป็นสิ่งจำเป็นตามปฏิกิริยาทางอ้อมของคูมบ์ส (รูปที่ 12)

สถานที่สำคัญในการรักษา PNH ถูกครอบครองโดย อาหารเสริมธาตุเหล็กและฮอร์โมนแอนโดรเจน- แนะนำให้ใช้การบำบัดด้วยอาหารเสริมธาตุเหล็กสำหรับผู้ป่วยที่มี PNH เมื่อตรวจพบภาวะ hypochromia ของเม็ดเลือดแดงและระดับเหล็กในเลือดลดลงในช่วงระยะของโรคที่เงียบสงบ ควรใช้อาหารเสริมธาตุเหล็กอย่างระมัดระวัง (ในขนาดเล็กและเท่านั้นเปรอส ) เนื่องจากความสามารถในการกระตุ้นให้เกิดวิกฤตเม็ดเลือดแดงแตกอย่างรุนแรงในผู้ป่วยบางรายที่มี PNH

การใช้แอนโดรเจนใน PNH ขึ้นอยู่กับผลการกระตุ้นของฮอร์โมนเหล่านี้ต่อการสร้างเม็ดเลือดแดง การให้ยา Nerabol หรือยาที่คล้ายคลึงกันในขนาด 30-40 มก./วัน ช่วยให้ระดับฮีโมโกลบินฟื้นตัวเร็วขึ้นหลังจากเกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก และด้วยเหตุนี้จึงช่วยลดความจำเป็นในการถ่ายเลือดได้อย่างมาก การใช้แอนโดรเจนมีประสิทธิภาพโดยเฉพาะอย่างยิ่งใน PNH ที่มีภาวะเม็ดเลือดแดงผิดปกติ

กลยุทธ์การรักษาภาวะแทรกซ้อนที่เกิดจากลิ่มเลือดอุดตันขึ้นอยู่กับตำแหน่งของการเกิดลิ่มเลือด ระยะเวลา และสถานะของระบบการแข็งตัวของเลือด ในกรณีที่ภาวะแทรกซ้อนนี้คุกคามชีวิตของผู้ป่วยจำเป็นต้องใช้การบำบัดด้วย thrombolytic และ anticoagulant ที่ซับซ้อน (fibrinolysin หรือ urokinase, กรดนิโคตินิก, เฮปารินและสารกันเลือดแข็งทางอ้อม) ตามกฎการรักษาทั่วไปและในปริมาณที่เพียงพอ

เนื่องจากมีรายงานภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพิ่มขึ้นหลังการให้เฮปาริน จึงควรใช้สารกันเลือดแข็งนี้ด้วยความระมัดระวังอย่างยิ่ง

ไม่ได้ระบุการตัดม้ามสำหรับ PNH เนื่องจากระยะเวลาหลังการผ่าตัดมักจะมีความซับซ้อนจากการเกิดลิ่มเลือดอุดตันในหลอดเลือด mesenteric ความเสี่ยงของการผ่าตัดเป็นที่ยอมรับได้ก็ต่อเมื่อมีอาการรุนแรงของภาวะม้ามโตมากเกินไป: เม็ดเลือดขาวชนิดลึก ภาวะแทรกซ้อนจากการติดเชื้อบ่อยครั้ง และ/หรือภาวะเกล็ดเลือดต่ำ ร่วมกับกลุ่มอาการเลือดออกรุนแรง

ยาเทคโนโลยีพันธุกรรมสมัยใหม่ Eculizumab (Soliris, SOLIRIS®) ได้รับการพัฒนาซึ่งได้รับการจดทะเบียนโดย FDA (สำนักงานคณะกรรมการอาหารและยา) เพื่อใช้รักษาเด็กและผู้ใหญ่ที่เป็นโรค PNH Eculizumab คือโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีลักษณะคล้ายไกลโคซิเลต - อิมมูโนโกลบุลินคัปปา (IgG2/4k) ที่จับกับโปรตีนส่วนเสริม C5 ของมนุษย์ และยับยั้งการกระตุ้นการสลายเซลล์ที่ใช้ส่วนเติมเต็ม แอนติบอดีประกอบด้วยบริเวณคงที่ของอิมมูโนโกลบุลินของมนุษย์และบริเวณที่กำหนดหาคู่เสริมของอิมมูโนโกลบุลินของหนูเมาส์ที่ฝังอยู่ในบริเวณแปรผันของสายเบาและสายหนักของแอนติบอดีของมนุษย์ อีคูลิซูแมบประกอบด้วยสายหนักสองสาย สายละ 448 กรดอะมิโน และสายเบาสองสาย สายละ 214 กรดอะมิโน น้ำหนักโมเลกุลคือ 147870 Da Eculizumab ผลิตในเซลล์ myeloma ของ murine ที่เพาะเลี้ยง NS0 และบริสุทธิ์โดยใช้โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนความสัมพันธ์และไอออน กระบวนการผลิตของสารยังรวมถึงกระบวนการยับยั้งและกำจัดไวรัสโดยเฉพาะ

Eculizumab ยับยั้งกิจกรรมสุดท้ายของส่วนเสริมของมนุษย์ โดยมีความสัมพันธ์สูงกับส่วนประกอบ C5 ผลที่ตามมาคือความแตกแยกขององค์ประกอบ C5 ใน C5a และ C5b และการก่อตัวของส่วนเสริมเทอร์มินัล C5b–9 ที่ซับซ้อนจึงถูกบล็อกอย่างสมบูรณ์ ดังนั้น eculizumab จึงคืนการควบคุมกิจกรรมเสริมในเลือดและป้องกันภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือดในผู้ป่วย PNH ในทางกลับกัน การขาดส่วนเติมเต็มจะมาพร้อมกับอุบัติการณ์ของการติดเชื้อจุลินทรีย์ห่อหุ้มที่เพิ่มขึ้น ซึ่งส่วนใหญ่เป็นการติดเชื้อไข้กาฬหลังแอ่น ในเวลาเดียวกัน eculizumab ยังคงรักษาเนื้อหาของผลิตภัณฑ์กระตุ้นการเสริมในระยะเริ่มต้นซึ่งจำเป็นสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของจุลินทรีย์และการกำจัดคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน การจ่ายยา Soliris ให้กับผู้ป่วยจะมาพร้อมกับกิจกรรมเสริมส่วนปลายที่ลดลงอย่างรวดเร็วและคงที่ ในผู้ป่วยส่วนใหญ่ที่มี PNH ความเข้มข้นของอีคูลิซูแมบในพลาสมาประมาณ 35 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ก็เพียงพอที่จะยับยั้งภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือดที่เกิดจากการกระตุ้นส่วนเติมเต็มได้อย่างสมบูรณ์

ด้วยผลลัพธ์ทางคลินิกใหม่ๆ ที่ไม่เหมือนใคร และการเปิดโอกาสในการรักษาสำหรับแพทย์เพื่อรักษาชีวิตและสุขภาพที่สมบูรณ์ของผู้ป่วย Eculizumab ได้รับการขึ้นทะเบียนอย่างรวดเร็ว โดยไม่ต้องดำเนินการทดลองทางคลินิกระยะที่สาม ซึ่งจะช่วยชีวิตผู้คนมากมาย ทั้งเด็กและ ผู้ใหญ่

ในเรื่องนี้ หลังจากการจดทะเบียนในสหรัฐอเมริกา คณะกรรมการยาแห่งยุโรปได้ออกความเห็นเชิงบวกเกี่ยวกับการเร่งจดทะเบียน Eculizumab ในยุโรป ซึ่งคาดว่าจะเกิดขึ้นในอนาคตอันใกล้นี้เช่นกัน

เมื่อพิจารณาถึงค่าใช้จ่ายที่สูงของ eculizumab ความเป็นไปไม่ได้ที่จะใช้มันเพื่อมีอิทธิพลต่อสาเหตุของโรคและความจริงที่ว่ามันต้องใช้ไปตลอดชีวิต กลยุทธ์การสำรองนั้นสามารถนำไปใช้ได้มากที่สุด โดยมีไว้สำหรับผู้ป่วยที่มีเซลล์ PNH จำนวนมาก หรือสำหรับผู้ป่วยที่มีแนวโน้มที่จะเกิดลิ่มเลือดอุดตัน โดยไม่ขึ้นอยู่กับขนาดของโคลน PNG

ปัจจุบันการรักษา PNH แบบรุนแรงเพียงอย่างเดียวคือการปลูกถ่ายไขกระดูกแบบ allogeneic

หลักสูตรและการพยากรณ์โรค

การพยากรณ์โรคขึ้นอยู่กับความรุนแรงของโรค โดยอาการแย่ลงในผู้ป่วยที่ต้องอาศัยการถ่ายเลือด โดยมีภาวะลิ่มเลือดอุดตันรุนแรง ในผู้ป่วย 10% พบว่าการทุเลาของโรคที่เกิดขึ้นเอง ในส่วนอื่น ๆ จะเปลี่ยนเป็นโรคโลหิตจาง aplastic, MDS และใน 5% - เป็นมะเร็งเม็ดเลือดขาวเฉียบพลัน โดยเฉลี่ยแล้วอายุขัยจะอยู่ที่ 10 – 15 ปี

PNH เป็นโรคเรื้อรังและปัจจุบันรักษาไม่หาย ความรุนแรงของ PNH และการพยากรณ์โรคส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับขนาดของประชากรเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อส่วนประกอบ ความสามารถในการชดเชยของไขกระดูก และการเกิดภาวะแทรกซ้อน โดยเฉพาะอย่างยิ่งภาวะลิ่มเลือดอุดตันในหลอดเลือดดำ แนวคิดเรื่องการพยากรณ์โรคที่รุนแรงสำหรับ PNH มีการเปลี่ยนแปลงเมื่อเร็ว ๆ นี้เนื่องจากมีการแนะนำการบำบัดตามอาการ

จำนวนผู้ป่วยที่อยู่ในภาวะได้รับค่าชดเชยทางคลินิกและโลหิตวิทยามาเป็นเวลานานและดำเนินชีวิตตามปกติในเวลานี้เพิ่มขึ้น อุบัติการณ์ของการเกิดลิ่มเลือดอุดตันที่รุนแรงถึงชีวิตได้ลดลง ในผู้ป่วยบางรายเมื่อเวลาผ่านไปจะมีการบรรเทาโรคโดยสัดส่วนของเม็ดเลือดแดงที่ไวต่อส่วนประกอบลดลง ในบางกรณีที่เกิดขึ้นไม่บ่อยนักจะมีการอธิบายการหายตัวไปอย่างสมบูรณ์ของเซลล์เม็ดเลือดแดงทางพยาธิวิทยาซึ่งบ่งบอกถึงความเป็นไปได้ขั้นพื้นฐานในการรักษาโรค

เจ้าของสิทธิบัตร RU 2574968:

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ และสามารถใช้สำหรับการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ตัวอย่างเลือดที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะถูกย้อมด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดี CD235a (FITC)/CD59(PE)/CD71 (APC) การมีอยู่ของโคลน PNH ในเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ได้รับการประเมินโดยการไม่มีโปรตีนป้องกัน CD59 บนเยื่อหุ้มของเรติคูโลไซต์ที่แยกได้โดยเกต CD235a - เครื่องหมายแพน - เม็ดเลือดแดงและ CD71 - ตัวรับการถ่ายโอน เพื่อประเมินโคลน PNH ระหว่างเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ มีการรวบรวมเหตุการณ์อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์ ซึ่งขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟ FSC(log) เทียบกับ SSC(log) ถูกสร้างขึ้น ที่ซึ่งเรติคูโลไซต์ถูกแยกเดี่ยวโดยใช้เกท CD71str เพิ่มเติม ดังนั้นการล้างประชากรเรติคูโลไซต์จากเศษซากและเพิ่มเป็นสองเท่าโดยใช้วิธีการเกตติ้งตามลำดับ หากมีเรติคูโลไซต์ที่เป็นบวกต่อ CD59 100% การไม่มีโคลน PNH จะถูกตัดสินและมีการวินิจฉัยว่าไม่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal หากตรวจพบ reticulocytes CD59 เชิงลบในผู้ป่วยที่มีอาการทางคลินิกและค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับมากกว่า 1% จะมีการสรุปการวินิจฉัยเกี่ยวกับการมีอยู่ของโคลน PNH และเพื่อยืนยันการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal การศึกษาเพิ่มเติม ขอแนะนำตามระเบียบการมาตรฐานสากล หากตรวจพบเรติคูโลไซต์เชิงลบ CD59 และค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับคือ 0.1-1% การมีอยู่ของโคลน PNH รองจะถูกตัดสินและขอแนะนำให้พิจารณาโคลน PNH อีกครั้งหลังจาก 6 เดือนเพื่อตรวจสอบการเพิ่มขึ้นของ คุณค่าและการพัฒนาของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal และหากขนาดนี้ได้รับการยืนยัน โคลนจะได้รับการวินิจฉัยว่ามีรูปแบบไม่แสดงอาการของฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal โดยไม่มีอาการทางคลินิก การใช้เกทหลายพารามิเตอร์ของเซลล์ CD71+ ทำให้สามารถแยกเศษ ดับเบิ้ลต์ และโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จับอย่างไม่จำเพาะออกจากการวิเคราะห์ ป่วย 1 ราย

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาการแพทย์ กล่าวคือ วิธีการวินิจฉัยทางคลินิกและทางห้องปฏิบัติการ และสามารถใช้สำหรับการตรวจคัดกรองการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน (PNH) แบบ paroxysmal

ภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน Paroxysmal เป็นโรคที่หายาก

PNH เกิดขึ้นเนื่องจากการกลายพันธุ์ของยีน PIG-A เป็นผลให้การสังเคราะห์สมอ glycosylphosphatidylinositol (GPI) ซึ่งแก้ไขโมเลกุลจำนวนมากบนเยื่อหุ้มเซลล์ของเซลล์เม็ดเลือด (รวมถึง CD24 บน granulocytes, CD14 บนโมโนไซต์, CD59 บนเม็ดเลือดแดงและสารตั้งต้น) ซึ่งปกป้องเซลล์เม็ดเลือดจากผลกระทบของ ระบบเสริมถูกรบกวน

เยื่อหุ้มเซลล์เม็ดเลือดแดงสัมผัสกับคอมเพล็กซ์การโจมตีของเมมเบรนมากที่สุด และหากไม่มีโปรตีน CD59 ที่ป้องกันได้ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก

PNH มีลักษณะเฉพาะคือภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือด, โรคโลหิตจาง, ฮีโมโกลบินนูเรีย, ภาวะแทรกซ้อนที่เกิดจากลิ่มเลือดอุดตัน, กลืนลำบาก, ความเกียจคร้าน, สมรรถภาพทางเพศผิดปกติ, ไตวายเรื้อรัง และความดันโลหิตสูงในปอด

นอกจากนี้ โคลน PNH สามารถเกิดขึ้นได้ในโรคโลหิตจางจากไขกระดูกฝ่อ, โรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิต้านทานตนเอง และกลุ่มอาการ myelodysplastic ค่ามัธยฐานอายุสำหรับการเกิด PNH คือ 30-35 ปี อุบัติการณ์ของภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal อยู่ระหว่าง 1 ถึง 10:1 ล้านคน อัตราการเสียชีวิตที่ไม่ได้รับการรักษาสำหรับฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal อยู่ที่ประมาณ 35% ภายใน 5 ปีนับจากเริ่มมีอาการ

ปัจจุบันเทคโนโลยีเซลลูล่าร์ได้เกิดขึ้นซึ่งทำให้สามารถพัฒนาวิธีการรักษาโรคที่ทันสมัยได้

ในเรื่องนี้จำเป็นต้องสร้างวิธีการวินิจฉัยที่แม่นยำเพราะ ประสิทธิภาพและความเพียงพอของการรักษาขึ้นอยู่กับข้อมูล ความเที่ยงธรรม และหลักฐานของมาตรการวินิจฉัย และความสมบูรณ์ของข้อมูลที่ได้รับ ซึ่งช่วยให้สามารถประเมินการมีอยู่ของโคลน PNH และชี้แจงการวินิจฉัย

มีวิธีที่รู้จักกันดีในการตรวจหา PNH โดยใช้วิธี Hem ในการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal (Abdulkadyrov K.M., โลหิตวิทยาทางคลินิก, การอ้างอิง - เซนต์ปีเตอร์สเบิร์ก: Peter, 2006, หน้า 82) โดยอิงจากการกระตุ้นการปิดใช้งานระบบเสริม อันเป็นผลมาจากการทำให้เป็นกรดของตัวอย่างเลือดและเพิ่มความไวต่อเม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ผลการทดสอบ Hem จะได้รับการประเมินด้วยสายตา

วิธีการประกอบด้วยการเติมสารละลาย HCl ปกติ 0.2 ลงในซีรั่มในเลือดของผู้บริจาคซึ่งเทียบได้กับซีรั่มของผู้ป่วยตามระบบแอนติเจน ABO โดยเปลี่ยน pH ในซีรั่มเป็น 6.4 และทำให้เกิดการกระตุ้นเสริม (อัตราส่วนซีรั่มต่อกรด 9: 1) . จากนั้นเวย์ที่เป็นกรดสิบปริมาตรจะผสมกับเม็ดเลือดแดงที่ถูกล้าง 50% หนึ่งปริมาตร จากนั้นทำการประเมินด้วยภาพของระบบกันสะเทือนที่เกิดขึ้น ด้วยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงจะเกิดขึ้นและระบบแขวนลอยจะกลายเป็นสีแดงหรือสีแดง ในขณะที่เซลล์เม็ดเลือดแดงปกติภายใต้สภาวะเดียวกันจะไม่ทำให้เม็ดเลือดแดงแตก

อย่างไรก็ตาม เทคนิคไม่มีความไวเพียงพอที่จะระบุโคลน PNH รอง: ขนาดโคลนที่ตรวจพบขั้นต่ำคือ 4.2-5% วิธีการของเฮมไม่ได้ให้ข้อมูลเกี่ยวกับขนาดของโคลน

ทั้งหมดนี้ไม่สามารถประมาณค่าโคลน PNH เป็นเปอร์เซ็นต์ได้ ซึ่งเมื่อตรวจพบโรคระหว่างการตรวจคัดกรอง จะเป็นจุดเริ่มต้นสำหรับการติดตามติดตามและการรักษาอย่างเพียงพอในภายหลัง

นอกจากนี้เทคนิคนี้ยังใช้แรงงานเข้มข้นมากและไม่ตรงตามข้อกำหนดในการวินิจฉัยสมัยใหม่

นอกจากนี้ยังมีวิธีที่ทราบกันดีในการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal โดยใช้การทดสอบซูโครส (“ปัญหาทางโลหิตวิทยาและการถ่ายเลือด”, 1972, สิงหาคม, 17(8)55-7, “การประเมินการทดสอบซูโครสสำหรับการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal ", Idelson L.I. , Benisovich V.I. , Savina L.S. , Radzhivilovskaya E.G. )

วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความไวที่เพิ่มขึ้นของเม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ต่อโปรตีนของระบบเสริมในกรณีนี้เนื่องจากการเติมซูโครส

เซรั่มผู้บริจาคสดที่เหมือนกันกับกลุ่มเลือดของผู้ป่วยจะถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วย ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงสามครั้งในน้ำเกลือ (0.145 โมลาร์ NaCl) เติมเลือดซิเตรตหรือเลือดที่ถูกละลายฟอง 100 ไมโครลิตรลงในสารละลายซูโครส 900 มล. และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37°C หรือ 23°C จากนั้นหลอดจะถูกปั่นเหวี่ยงและประเมินส่วนเหนือตะกอนเพื่อดูภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่มองเห็นได้ หากภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเกิดขึ้น ระดับของมันซึ่งแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์จะถูกคำนวณจากความเข้มข้นของฮีโมโกลบินเหนือตะกอน ซึ่งกำหนดโดยวิธีไซยาเมฮีโมโกลบิน

ตัวอย่างเลือดครบส่วนผสม 9:1 กับโซเดียมซิเตรต 3.2% หรือสารละลายออกซาเลต 0.1 โมลาร์ และเลือดครบส่วนถูกกระตุ้นหัวใจโดยการเติมเม็ดแก้วขนาด 4 มม. ลงในเลือด 2 มล. ปริมาณเลือดครบส่วนและพลาสมาที่ปราศจากเกล็ดเลือดจะถูกผสมกันในสัดส่วนที่ต่างกัน สารละลายไอโซโทนิกซูโครสเตรียมโดยการละลายรีเอเจนต์ซูโครสพิเศษ 0.27 โมลใน 91 มล. ของ 50 mM NaH 2 PO 4 และ 9 มล. ของ NaHPO 4 หากจำเป็น ให้ปรับ pH เป็น 6.1 โดยมี NaOH ที่มีความเข้มข้นเล็กน้อย เทน้ำ 1,000 มล. ลงในปริมาตรสุดท้าย

หลอดถูกปั่นเหวี่ยงและส่วนเหนือตะกอนได้รับการประเมินสำหรับภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่มองเห็นได้ เปอร์เซ็นต์ของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเป็นค่าที่คำนวณได้ ซึ่งคำนวณจากความเข้มข้นของฮีโมโกลบินเหนือตะกอน ซึ่งกำหนดโดยวิธีไซยาเมฮีโมโกลบิน นอกจากนี้ยังมีการเตรียมส่วนลงตัวอื่นๆ อีกสองส่วน ได้แก่ ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก 100% และภาวะเม็ดเลือดแดงแตก "เป็นศูนย์" (ไม่มีเซลล์เม็ดเลือดแดง) สำหรับการประเมินตัวอย่าง

ข้อเสียของวิธีนี้คือการขาดความไวและความจำเพาะในการวินิจฉัยโรค: ขนาดโคลนที่ตรวจพบขั้นต่ำ - 4.2-5% ไม่ได้ให้ความคิดที่ถูกต้องเกี่ยวกับขนาดของโคลนในขณะที่สามารถปรากฏได้ในผู้ป่วย เลือดที่มีค่าต่ำกว่า - น้อยกว่า 4.2% ข้อเสียของวิธีนี้ยังรวมถึงความเข้มข้นของแรงงานด้วย

นอกจากนี้ยังมีวิธีที่ทราบกันดีในการวินิจฉัยโคลน PNH (Rosse WF. Variations in the red cells in paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Br J Haematol 1973; 24:327-42.12) รวมถึงการวัดและวิเคราะห์ระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่ต่างกัน เสริมความเข้มข้น การทดสอบนี้แสดงให้เห็นว่าเซลล์ PNH ถูก lysed ที่ความเข้มข้นต่ำกว่าเซลล์ปกติ

การทดสอบนี้ระบุประชากรของเซลล์ที่มีความไวปานกลางต่อโปรตีนเสริม (ประเภท II) ระหว่างเซลล์เม็ดเลือดแดงปกติ (ประเภท I) และเซลล์เม็ดเลือดแดงทางพยาธิวิทยาในภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal (ประเภท III) อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้ใช้แรงงานเข้มข้นและยากต่อการสร้างมาตรฐาน เมื่อใช้การทดสอบ อาจพลาดจำนวนเซลล์ที่ผิดปกติจำนวนเล็กน้อย

มีวิธีการที่ทราบกันดีสำหรับการแยกเรติคูโลไซต์ด้วย CD71 เพื่อระบุ PNH โคลนโดยโฟลไซโตเมทรีระหว่างเรติคูโลไซต์และแกรนูโลไซต์ (Tsagarakis NJ, Paterakis G. Asimple flow cytometric assay สำหรับการทดสอบ paroxysmal nocturnal hemoglobinuria ตามปกติโดยอิงจากเรติคูโลไซต์และแกรนูโลไซต์ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ - ClinicalCytometry, 07.2012 . - ค. 259-263) (http://onlinelibrary.wiley.coni/doi/10.1002/cyto.b.21030/full)

ตรวจสอบเลือดทั้งหมดของผู้ป่วยและเจือจางในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 1:100 เติมเลือดเจือจาง 50 ไมโครลิตรลงในสองหลอด จากนั้นทำการย้อมสี: ในหลอดแรก โมโนโคลนอลแอนติบอดี (mAbs) 10 ไมโครลิตรถึง CD71 และ 20 ไมโครลิตรของ mAbs ถึง CD59; IgGl กลุ่มควบคุมไอโซไทป์ 10 ไมโครลิตรถูกเติมไปยังหลอดที่สอง ผลลัพธ์ได้รับการประเมินโดยใช้ฮิสโตแกรมพารามิเตอร์เดียว

นอกจากนี้ วิธีนี้ยังวิเคราะห์แกรนูโลไซต์โดยใช้ mAbs ผสมกัน: 1) CD59-FITC /CD24-PE /CD45-PE-Cy5/; 2) CD66b-FITC /CD16-PE /CD45-PE-Cy5

ตามวิธีนี้ความไวในการพิจารณาโคลน PNH ใน granulocytes คือ 1% ความไวในการพิจารณาโคลน PNH ใน reticulocytes คือ 5% อย่างไรก็ตาม วิธีการที่นำเสนอได้รับการทดสอบกับผู้ป่วยจำนวนไม่มากที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal (n=8) และมีโคลน PNH น้อยกว่า 1% (เมื่อประเมินบนแกรนูโลไซต์ และด้วยเหตุนี้ น้อยกว่า 5% เมื่อพิจารณาบนเรติคูโลไซต์ ) (n=7) นอกจากนี้ความไวในการพิจารณาโคลนบนเรติคูโลไซต์ (5%) ไม่อนุญาตให้ใช้เทคนิคในการประเมินโคลนพร้อมกันระหว่างแกรนูโลไซต์และเรติคูโลไซต์ ในเวลาเดียวกันในบรรดาตัวอย่างเลือดของผู้ป่วยที่สงสัยว่า PNH ไม่มีผู้ที่มีขนาดโคลน 1-24% ซึ่งไม่ได้ให้ภาพที่สมบูรณ์ของความสัมพันธ์ของค่าในช่วงนี้ ด้วยวิธีการนี้ การเกตเรติคูโลไซต์เป็นเรื่องยากเนื่องจากไม่มีเครื่องหมายแพน-อีรีโทรไซต์ (CD235a) ในแผง ซึ่งจำเป็นอย่างยิ่งสำหรับการแยกประชากรบริสุทธิ์และกำจัดเศษและดับเบิ้ล นอกจากนี้ เพื่อประเมินโคลน PNH อย่างเป็นกลาง จะต้องประเมินเซลล์นับหมื่นเซลล์ การทดสอบหนึ่งครั้งโดยใช้วิธีที่เสนอต้องใช้แอนติบอดีจำนวนมาก จำนวนรวมของเหตุการณ์ gated (CD71) ที่รวบรวม (2,000 เหตุการณ์) อาจไม่เพียงพอที่จะระบุโคลน

ดังนั้น วิธีการที่ทราบนี้จึงได้รับการทดสอบกับผู้ป่วยจำนวนไม่มากที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนและโคลน PNH เซลล์ที่ผูกมัดอย่างไม่เฉพาะเจาะจงกับ CD71 mAbs มีแนวโน้มที่จะบิดเบือนผลลัพธ์ของการวิเคราะห์ นอกจากนี้ โมโนโคลนอลแอนติบอดี 6 ชนิดถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์นี้ โดย 2 ชนิดถูกใช้สองครั้ง ซึ่งสะท้อนให้เห็นในราคาที่สูงของแผง mAb ที่ใช้ วิธีการนี้ได้รับการทดสอบกับคนไข้ 8 รายที่มี PNH โดย 7 คนในนั้นมีค่าโคลนต่ำกว่าเกณฑ์ความไว (1% สำหรับแกรนูโลไซต์, 5% สำหรับเรติคูโลไซต์) วิธีการนี้ไม่สามารถแก้ปัญหาในการระบุโคลน PNH รองได้อย่างน่าเชื่อถือ และไม่ได้พิสูจน์ถึงความไวสูงของวิธีการนี้

ในฐานะที่เป็นอะนาล็อกที่ใกล้เคียงที่สุด วิธีการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal โดยโฟลไซโตเมทรีเสนอโดยสมาคมระหว่างประเทศของคลินิกไซโตเมทรี (ICCS) (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. แนวทางการวินิจฉัยและการติดตามภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal และ เกี่ยวข้องกับความผิดปกติ flow cytometry ออนไลน์: 28 เมษายน 2010 DOI:10.1002/cyto.b.20525)

วิธีการนี้เกี่ยวข้องกับการศึกษาการมีอยู่ของโปรตีนที่เชื่อมโยงกับ GPI บนแกรนูโลไซต์ โมโนไซต์ และเม็ดเลือดแดง การศึกษาประกอบด้วยสองขั้นตอน: การเตรียมตัวอย่างและการวิเคราะห์ภายหลังบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์

ในการวิเคราะห์เซลล์เม็ดเลือดแดง เลือดครบส่วนจะถูกเจือจางด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตในอัตราส่วน 1:100 โดยเติมเลือดครบ 10 ไมโครลิตรลงในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 990 ไมโครลิตร ถัดไป 40 ไมโครลิตรของสารแขวนลอยเซลล์ที่ได้จะถูกเพิ่มลงในหลอดที่มีป้ายกำกับ ในการย้อมสีเม็ดเลือดแดง โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่คอนจูเกตด้วยฟลูออโรโครม CD59 ที่มีฉลาก CD235FITC และฟลูออโรโครมที่มีฉลาก PE จะถูกเติมไปยังสารแขวนลอยของเซลล์ตามลำดับ หลังจากการบ่มด้วยโมโนโคลนอล แอนติบอดีเป็นเวลา 30 นาทีในความมืด ตัวอย่างจะถูกล้างเพื่อกำจัดโมโนโคลนอล แอนติบอดีที่ยังไม่ได้จับออก ในการวิเคราะห์เม็ดเลือดแดง การล้างจะดำเนินการสองครั้งโดยการปั่นแยกตัวอย่างในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 4 มล. ที่ 1,500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นนำส่วนเหนือตะกอนออกไป เซลล์จะถูกแขวนลอยอีกครั้ง และเติมน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 500 ไมโครลิตรลงไป การวิเคราะห์.

ในการรวบรวมและวิเคราะห์เซลล์เม็ดเลือดแดงบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ กราฟต่อไปนี้จะถูกสร้างขึ้นโดยใช้ซอฟต์แวร์ของอุปกรณ์:

กราฟ-FS (บันทึก) เทียบกับ (เทียบกับ) SS (บันทึก) ซึ่งประชากรของเม็ดเลือดแดงถูกแยกออก (มีการสร้างประตู RBC) และคัดแยกเศษ เกล็ดเลือด และมวลรวมของเม็ดเลือดแดง

กราฟ CD235a(log) เทียบกับ FS(log) สะท้อนเหตุการณ์จากเกต RBC เพื่อให้เน้นประชากรของเม็ดเลือดแดงได้ชัดเจนยิ่งขึ้น ประชากรของเม็ดเลือดแดงที่ให้ผลบวกสำหรับเครื่องหมาย CD235a และสร้างเกทใหม่ (CD235a+)

CD59(log) กับ CD235a (ฮิสโตแกรมแสดงเหตุการณ์ที่ควบคุมโดย CD235a+) ฮิสโตแกรมแสดงระดับการแสดงออกของ CD59 บนเซลล์เม็ดเลือดแดง เซลล์ที่ไม่มีการขาด CD59 - ประเภทที่ 1 เป็นเซลล์เม็ดเลือดแดงปกติ เซลล์ที่มีความบกพร่องในการแสดงออกของ CD59 บางส่วนจะเป็นโคลน PNH ประเภท II เซลล์ที่ไม่แสดงออกถึง CD59 กล่าวคือ เม็ดเลือดแดงที่มีการขาด CD59 อย่างสมบูรณ์จะเป็นโคลน PNH ประเภท III

ตามวิธีการดังกล่าว จะมีการรวบรวมเหตุการณ์ทางไซโตเมตริกอย่างน้อย 50,000 เหตุการณ์

เพื่อเตรียมพร้อมสำหรับการวิเคราะห์แกรนูโลไซต์และโมโนไซต์ ให้เติมเลือดส่วนปลาย 100 ไมโครลิตรลงในหลอดที่มีป้ายกำกับสองหลอด ถัดไป เพื่อย้อมด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีฉลาก จะมีการเพิ่มการผสมผสานของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีฉลากแตกต่างกันลงในแต่ละหลอด:

การรวมกันของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีป้ายกำกับเพื่อตรวจสอบ PNH โคลนในหมู่แกรนูโลไซต์ FLAER(AlexaFluor700)/CD15(PE)/CD24(PerCP)/CD45(PE-Cy7) (เครื่องหมาย gating: CD45 และ CD15, GPI - เครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับ FLAER และ CD24) ;

การรวมกันของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีป้ายกำกับเพื่อตรวจสอบโคลน PNH ในหมู่โมโนไซต์ FLAER (AlexaFluor700) / CD14PE / CD64PerCP / CD45PE-Cy7 โดยที่เครื่องหมาย gating: CD45 และ CD64, GPI - เครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับ FLAER และ CD14;

ตัวอย่างที่เปื้อนจะถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด หลังจากนั้นจึงเติมสารละลายสลาย 1 มิลลิลิตรลงในตัวอย่างเพื่อกำจัดเซลล์เม็ดเลือดแดง หลังจากการบ่มด้วยสารละลายสลายสลาย ตัวอย่างจะถูกปั่นแยกเป็นเวลา 5 นาทีที่ 1500 รอบต่อนาที หลังจากการปั่นแยก ส่วนเหนือตะกอนจะถูกระบายออก และเม็ดเลือดขาวที่ด้านล่างของหลอดจะถูกแขวนลอยอีกครั้ง จากนั้น ตัวอย่างจะถูกล้างออกจากสารละลายสลายตัวโดยเติมน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 2 มิลลิลิตรลงในตัวอย่าง จากนั้นจึงปั่นแยกเป็นเวลา 5 นาทีที่ 1500 รอบต่อนาที หลังจากการปั่นแยก ส่วนลอยเหนือตะกอนจะถูกทิ้งไป เซลล์ต่างๆ จะถูกแขวนลอยอีกครั้ง และเติมน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 500 ไมโครลิตร เพื่อการวิเคราะห์ต่อไป

ในการวิเคราะห์และรวบรวมแกรนูโลไซต์และโมโนไซต์บนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ กราฟต่อไปนี้จะถูกสร้างขึ้นโดยใช้ซอฟต์แวร์ของอุปกรณ์:

บนกราฟ CD45(log) เทียบกับ SS พื้นที่ของลิมโฟไซต์ CD45+LY (เซลล์ของพื้นที่ที่มีการแสดงออกสูงของ CD45 ค่า SS ต่ำ) โมโนไซต์ CD45+MON (เซลล์ของพื้นที่ การแสดงออกโดยเฉลี่ยของ CD45, ค่า SS ที่สูงกว่า) และ granulocytes CD45+GRAN (เซลล์ของพื้นที่ที่มีการแสดงออก CD45 ต่ำ, ค่า SS สูง)

ในการวิเคราะห์โคลน PNH ระหว่างแกรนูโลไซต์ กราฟของ CD 15 (log) เทียบกับ SS จะถูกพล็อตโดยขึ้นอยู่กับเกต (CD45+GRAN) เมื่อใช้เกต CD15+ ประชากรของแกรนูโลไซต์จะถูกแยกออกโดยไม่มีเศษซากและเซลล์ที่ไม่ได้จับโมโนโคลนอลแอนติบอดีกับ CD15

ฮิสโตแกรม FLAER (บันทึก) เทียบกับ CD24 (บันทึก) (สร้างขึ้นโดยขึ้นอยู่กับเกต CD15+ กราฟนี้จะพล็อตเกท PNH GRAN ซึ่งจับโซนที่เป็นลบสำหรับการแสดงออกของ CD24 และ FLAER การไม่มีเครื่องหมายเหล่านี้บนแกรนูโลไซต์บ่งชี้ว่าเซลล์ อยู่ในโคลน PNH

ในการประเมินโคลน PNH ในกลุ่มโมโนไซต์ กราฟของ -CD64(log) เทียบกับ SS จะถูกพล็อตโดยขึ้นอยู่กับเกท CD45 MON ในพล็อตนี้ เหตุการณ์บวก C064 ถูกจำกัดไว้ที่เกต CD64+MON ขึ้นอยู่กับเกต CD64+MON, กราฟ -FLAER(log) เทียบกับ CD14(log) ถูกพล็อต (ขึ้นอยู่กับประชากรที่เลือกของ CD64+ มอนอไซต์ - เกต) กราฟนี้แสดงเกต PNH MON ซึ่งจับโซนลบสำหรับนิพจน์ CD14 และ FLAER การไม่มีเครื่องหมายเหล่านี้บนโมโนไซต์บ่งชี้ว่าเซลล์นั้นเป็นของโคลน PNH

ค่าโคลน PNH คือเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ (แกรนูโลไซต์ โมโนไซต์ เม็ดเลือดแดง) โดยที่ไม่มีโปรตีนสมอที่เชื่อมโยงกับ GPI

การศึกษาโคลน PNH ตามระเบียบการระหว่างประเทศถือเป็น "มาตรฐานทองคำ" ในการวินิจฉัย PNH อย่างไรก็ตามการวิจัยมีราคาแพงและใช้เวลานาน ใช้เวลาอย่างน้อย 2.5-3 ชั่วโมงในการเตรียมและดำเนินการวิเคราะห์ตามวิธีนี้

เนื่องจาก PNH เป็นโรคที่หายาก ตามแหล่งต่างๆ พบว่ามีผู้ป่วย 1 ถึง 10 คนต่อประชากร 1 ล้านคน ผู้ป่วยส่วนใหญ่ที่ส่งต่อเพื่อรับการวินิจฉัยโคลน PNH จะไม่เป็นผลบวกของ PNH ดังนั้น จึงไม่แนะนำให้ทำการวิเคราะห์ที่ใช้แรงงานเข้มข้นและมีราคาแพงตามระเบียบการระหว่างประเทศสำหรับผู้ป่วยที่ไม่มี PNH แต่เพียงตอบคำถามว่ามีโคลน PNH อยู่หรือไม่ก็เพียงพอแล้ว โดยมีราคาโมโนโคลนอลแอนติบอดีติดฉลากเริ่มต้นที่ 500 USD สำหรับหนึ่งรายการ ชุดแอนติบอดีและรีเอเจนต์ครบชุดสำหรับการวินิจฉัย PNH ตามแนวทางสากลจะมีราคาตั้งแต่ 5,000 USD ด้วยอายุการเก็บรักษาที่สั้นของรีเอเจนต์ที่จำเป็นบางส่วน แม้แต่ในเมืองที่มีประชากร 1 ล้านคน สามารถตรวจสอบผู้ป่วยได้ตั้งแต่ 10 ถึง 100 รายต่อปีด้วยชุดอุปกรณ์เพียงชุดเดียว ตามลำดับ ต้นทุนของการศึกษาหนึ่งครั้งอาจสูงถึง 500 ดอลล่าร์.

วัตถุประสงค์ของการประดิษฐ์คือเพื่อสร้างวิธีการที่แม่นยำ ละเอียดอ่อน และอิงตามหลักฐานเชิงประจักษ์สำหรับการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการของฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนที่มีภาวะ paroxysmal ซึ่งง่ายต่อการนำไปใช้ เข้าถึงได้ และช่วยให้สามารถคัดกรองฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal ด้วยต้นทุนวัสดุที่น้อยที่สุด

สาระสำคัญของการประดิษฐ์คือในวิธีการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal รวมถึงการย้อมเลือดทั้งหมดของผู้ป่วยด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต การฟักตัว การล้างเซลล์เม็ดเลือดจากโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ไม่ได้ผูกไว้โดยการหมุนเหวี่ยง การแขวนลอยตัวอย่างที่เสร็จแล้วอีกครั้ง การประเมินขนาดโคลนหรือการไม่มีในโปรแกรมโฟลว์ไซโตมิเตอร์ในภายหลังสำหรับการไม่มีหรือมีอยู่ของโปรตีนป้องกัน เพื่อเปื้อนตัวอย่างเลือดภายใต้การศึกษา การผสมโมโนโคลนอลแอนติบอดี CD235a (FITC)/CD59(PE) สามสีเข้าด้วยกัน ใช้ CD71 (APC) ซึ่งเพิ่มลงในหลอดทดลองพร้อมกับตัวอย่างการมีอยู่ของโคลน PNH ในเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ได้รับการประเมินโดยการไม่มีโปรตีนป้องกัน CD59 บนเมมเบรนของเรติคูโลไซต์ที่แยกได้โดยเกต CD235a - a เครื่องหมายแพน-อีรีโทรไซต์และรีเซพเตอร์การถ่ายโอน CD71; เพื่อประเมินโคลน PNH ระหว่างเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์ถูกรวบรวม ขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟถูกพล็อต FSC(log) เทียบกับ SSC(log) ใน ซึ่งเรติคูโลไซต์จะถูกแยกออกโดยใช้เกต CD71str เพิ่มเติม ดังนั้นจึงทำให้ประชากรเรติคูโลไซต์บริสุทธิ์จากเศษซากและดับเบิ้ลโดยใช้วิธีการเกตติ้งตามลำดับ ค่าตัวบ่งชี้ที่ได้รับจะถูกเปรียบเทียบกับเกณฑ์ปกติ และเมื่อมีเรติคูโลไซต์เชิงบวก CD59 100% จะไม่มี ของโคลน PNH ได้รับการตัดสินและมีการวินิจฉัยว่าไม่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal หากตรวจพบ reticulocytes CD59 เชิงลบในผู้ป่วยที่มีอาการทางคลินิกและค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับมากกว่า 1% จะมีการสรุปการวินิจฉัยเกี่ยวกับการมีอยู่ของโคลน PNH และเพื่อยืนยันการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal การศึกษาเพิ่มเติม แนะนำให้ใช้ตามระเบียบการมาตรฐานสากล หาก CD59 reticulocytes เป็นลบ และค่าเป็นตัวบ่งชี้ที่ได้รับ 0.1-1% จะตัดสินว่ามีโคลน PNH เล็กน้อย และแนะนำให้พิจารณาอีกครั้งของโคลน PNH หลังจาก 6 เดือนเพื่อเพิ่ม คุณค่าของมันและการพัฒนาของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal; เมื่อยืนยันขนาดโคลนนี้จะมีการวินิจฉัยรูปแบบไม่แสดงอาการของฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนโดยไม่มีอาการทางคลินิก

การใช้สิ่งประดิษฐ์ช่วยให้ได้รับผลลัพธ์ทางเทคนิคต่อไปนี้

วิธีการที่นำเสนอในการระบุโคลน PNH มีความน่าเชื่อถือ ความแม่นยำ และความไวสูง - 0.1% เทียบได้กับวิธีการมาตรฐานสากล และอิงตามหลักฐานเชิงประจักษ์

ช่วยให้คุณสามารถตรวจสอบการมีอยู่ของโคลน PNH ทั้งขนาดที่มีนัยสำคัญในผู้ป่วยที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ที่แท้จริงและผู้เยาว์ - จาก 0.01 ถึง 1% ในผู้ป่วยที่เป็นโรคโลหิตจาง aplastic และกลุ่มอาการ myelodysplastic

วิธีการนี้นำไปใช้ได้ง่ายกว่าและไม่ต้องใช้ต้นทุนวัสดุจำนวนมากเมื่อเทียบกับวิธีการมาตรฐานสากล

เทคโนโลยีในการพิจารณาโคลน PNH ทำให้สามารถใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีในปริมาณขั้นต่ำ (สาม) เมื่อทำการคัดกรอง PNH (CD235a, CD71, CD59)

ในการตรวจเลือดของผู้ป่วยรายหนึ่ง จะใช้เพียงหลอดเดียวเท่านั้น ซึ่งช่วยให้การวิเคราะห์ง่ายขึ้นและเร็วขึ้นอีกด้วย

เวลาที่ต้องทำการทดสอบหนึ่งครั้งคือ 40-50 นาที การใช้แอนติบอดีน้อยลงโดยไม่ใช้สารละลายสลายทำให้การทดสอบถูกลงประมาณ 75% ต่อการทดสอบ ในขณะเดียวกันก็รักษาความไวสูงและความแม่นยำในการวินิจฉัยไว้

ในกรณีส่วนใหญ่ วิธีการนี้จะหลีกเลี่ยงค่าใช้จ่ายเพิ่มเติมที่เกี่ยวข้องกับการใช้แอนติบอดี้มากขึ้น เนื่องจากผลที่ได้มักจะเป็นลบ เนื่องจากเกิดโรคได้ไม่บ่อยนัก เทคนิคนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการคัดกรองผู้ป่วยและเข้าถึงได้โดยสถาบันการแพทย์หลากหลายโปรไฟล์ตลอดจนประชาชนทุกประเภท

ผลลัพธ์สุดท้ายของการวิเคราะห์ในวิธีการที่เสนอจะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของเซลล์เม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ที่มีข้อบกพร่องในโปรตีนที่เชื่อมโยงกับ GPI นั่นคือโคลน PNH เทคนิคนี้ทำให้สามารถระบุความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการเกิดลิ่มเลือด โดยพิจารณาจากเปอร์เซ็นต์ของโคลน PNH ที่ระบุ

วิธีการที่นำเสนอนั้นดีกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีอื่นที่รู้จักกันดี - การทดสอบของ Hem, การทดสอบซูโครส, การวัดระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่ความเข้มข้นต่างๆ ของโปรตีนของระบบเสริม

ผลลัพธ์ทางเทคนิคเกิดขึ้นได้เนื่องจากเทคโนโลยีใหม่ที่พัฒนาโดยผู้เขียนในการพิจารณาโคลน PNH ในฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal โดยใช้โฟลไซโตเมทรีซึ่งเป็นอัลกอริธึมที่ให้การกำหนดโคลนนี้บนเรติคูโลไซต์และเม็ดเลือดแดง (ตรงข้ามกับการกำหนดมาตรฐานบน นิวโทรฟิล โมโนไซต์ และเม็ดเลือดแดง) ในกรณีนี้ ผู้เขียนใช้การรวมกันของแอนติบอดี CD235a(FITC)/CD59 (PE)/CD71(APC) เป็นครั้งแรก ตามวิธีการที่เสนอ ในช่วงเวลาของการวิเคราะห์ข้อมูล มีการใช้ขั้นตอนเพิ่มเติมสำหรับการเกตหลายพารามิเตอร์ของเซลล์ CD71+ และการแยกชิ้นส่วนออก เพิ่มเป็นสองเท่าจากการวิเคราะห์ และกำจัดโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ถูกผูกไว้อย่างไม่จำเพาะ

ประเด็นสำคัญคือการศึกษาเรติคูโลไซต์ ซึ่งตามเทคโนโลยีที่พัฒนาโดยผู้เขียน จะถูกแยกออกโดยใช้แอนติบอดีต่อ CD71 และตรวจสอบโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีสามตัว CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC) รวมกัน ) เลือกโดยผู้เขียน โคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์สะท้อนถึงคุณค่าที่แท้จริงของโคลน PNH ผู้เขียนเปรียบเทียบค่าที่ได้รับของโคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์กับค่าที่ได้รับโดยใช้แนวทางสากลที่เป็นมาตรฐานในการวินิจฉัย PNH ความสัมพันธ์ของปริมาตรของเรติคูโลไซต์ที่เป็นบวกของ PNH กับโมโนไซต์คือ 0.95 โดยมีแกรนูโลไซต์ - 0.93 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เป็นบวก PNH ตามวิธีการที่เสนอจะวัดด้วยความไวที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับแนวทางมาตรฐานสากลเนื่องจาก โดยใช้วิธีการที่นำเสนอ ตรวจเซลล์เม็ดเลือดแดงอย่างน้อย 1,000,000 เซลล์ และจากข้อมูลของ ICCS มีเพียง 500,000 เซลล์เท่านั้น

เป็นครั้งแรกที่มีการศึกษาโคลน PNH บนเรติคูโลไซต์โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดี CD235a/CD71/CD59 ร่วมกัน ซึ่งทำให้สามารถประมาณขนาดของโคลนนี้ด้วยความไว 100%

ด้วยเหตุนี้ จึงเป็นไปได้ที่จะคัดกรอง PNH โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีสามตัว การใช้ขั้นตอนเพิ่มเติมของการแยกเรติคูโลไซต์และเซลล์ "ตัด" เซลล์ที่จับกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีโดยไม่เฉพาะเจาะจง (ในกราฟ FS เทียบกับ SS รูปที่) ให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำ ซึ่งทำให้สามารถยืนยันการวินิจฉัย PNH ตามการตรวจคัดกรองและ ดำเนินการรักษาอย่างมีประสิทธิภาพเพียงพอ

วิธีการดำเนินการดังต่อไปนี้

เพื่อทำการศึกษา เลือดดำของผู้ป่วยจะถูกนำเข้าไปในหลอดทดลองที่มีสารต้านการแข็งตัวของเลือด K 2 EDTA หลอดทดลองจะถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการจากห้องบำบัดของสถานบำบัดและป้องกัน (HCI)

ในการวิเคราะห์เซลล์เม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ เลือดครบส่วนจะถูกเจือจางในหลอดโพลีสไตรีนที่แยกจากกัน ในการเจือจางด้วยน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟตในอัตราส่วน 1:10 ให้เติมเลือดครบ 50 ไมโครลิตรลงในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 450 ไมโครลิตร และผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 5 วินาทีบนกระแสน้ำวน จากนั้นจึงเติมสารแขวนลอยเซลล์ที่ได้ 40 ไมโครลิตร ไปยังหลอดที่มีป้ายกำกับ

ในการย้อมสีตัวอย่าง จะใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีผสมสามสี - CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC) การย้อมสีทำได้โดยการเติมโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีป้ายกำกับไว้ 3 ไมโครลิตรตามลำดับลงในตัวอย่าง หลังจากนั้นเขย่าหลอดเป็นเวลา 5 วินาทีบนกระแสน้ำวน จากนั้นนำไปบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที

จากนั้นเซลล์เม็ดเลือดจะถูกล้างสองครั้งในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 4 มล. ในโหมดการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาทีที่ความถี่ 1,500 รอบต่อนาที หลังจากการปั่นแยกแต่ละครั้ง ให้รวบรวมส่วนเหนือตะกอนอย่างระมัดระวังโดยใช้ปิเปต เพื่อให้เซลล์ยังคงอยู่ที่ด้านล่างของหลอด

ตัวอย่างที่เสร็จแล้วจะถูกแขวนลอยอีกครั้งเป็นเวลา 5 วินาทีโดยกระแสน้ำวน และเติมน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 750 ไมโครลิตร หลังจากนั้นตัวอย่างจะพร้อมสำหรับการวิเคราะห์บนโฟลว์ไซโตมิเตอร์

ต่อไป ผลลัพธ์จะได้รับการประเมินและบันทึกโดยใช้มัลติคัลเลอร์โฟลว์ไซโตเมทรี การวิเคราะห์สามารถทำได้บนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ที่ติดตั้งเครื่องตรวจจับสำหรับช่องฟลูออเรสเซนต์อย่างน้อยสามช่อง

การวัดจะดำเนินการบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ BD FACSCanto™ II Becton-Dickinson (สหรัฐอเมริกา)

การประเมินการมีหรือไม่มีโคลน PNH บนเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ รวมถึงขนาดของโคลน PNH ดำเนินการบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์โดยใช้ซอฟต์แวร์พิเศษ

ในการประเมินโคลน PNH ระหว่างเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ กราฟจะถูกสร้างขึ้น - FSC(log) เทียบกับ SSC(log) โดยใช้ข้อจำกัดเชิงตรรกะ พื้นที่ของเม็ดเลือดแดงจะถูกแยกออก ไม่รวมเศษและ doublets (รูปที่ 1a)

จากนั้น เกต CD235a+ จะถูกสร้างขึ้นบนพล็อต FSC (บันทึก) เทียบกับ CD235a (รูปที่ 1b) ดังนั้นจึงจำกัดเซลล์ที่เป็นบวกและไม่รวมเหตุการณ์ที่จับกับ CD235a อย่างไม่เฉพาะเจาะจง (เศษซากและเซลล์ที่ไม่ได้เป็นของประชากร CD235a+)

เหตุการณ์ที่เข้าสู่เกท CD235a+ จะถูกวิเคราะห์บนกราฟ CD71 เทียบกับ FSC (บันทึก) (รูปที่ 1e) ซึ่งเน้นประชากรที่เป็นบวกของ CD71

เพื่อประเมินโคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ อย่างเป็นกลาง จะมีการรวบรวมเหตุการณ์อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์

ขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟของ FSC(log) กับ SSC(log) ถูกพล็อต (รูปที่ 1f) ซึ่งเรติคูโลไซต์ถูกแยกออกโดยใช้เกท CD71str เพิ่มเติม และในที่สุดประชากรก็ถูกกำจัดออกจากเศษซากและ doublets โดยใช้วิธีการนี้ ของการ gating ตามลำดับ

จากนั้นกราฟของ CD235a กับ CD59 จะถูกพล็อต (รูปที่ 1g) ขึ้นอยู่กับเกท CD71str (เรติคูโลไซต์ที่เลือก) กราฟนี้แยกความแตกต่างสองภูมิภาค ได้แก่ Norm°Ret และ PNH°Ret (รูปที่ 1g) ซึ่งเป็นขอบเขตของเรติคูโลไซต์ปกติและ PNH บวกตามลำดับ สถิติจะแสดงเป็นค่าสัมบูรณ์และ % ของเกต (รูปที่ 1d และ 1h)

โปรโตคอลการรวบรวมข้อมูลได้รับการตั้งค่าเพียงครั้งเดียว และจำเป็นต้องมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเท่านั้นในภายหลัง

เกต CD235a+ เป็นเกตหยุดในขั้นตอนแรกของการรับข้อมูล เช่น รวบรวม 1,000,000 กิจกรรม เกต CD235a+ ถูกนำไปใช้กับพล็อต CD235a กับ CD59 (รูปที่ 1c) หากในภูมิภาค PNH Type II และ PNH Type III มีเหตุการณ์ทั้งหมดไม่เกิน 10 เหตุการณ์บนกราฟ CD235a เทียบกับ CD59 การรวบรวมข้อมูลจะหยุดลงและสรุปได้ว่าไม่มีโคลน PNH

หากจำนวนกิจกรรมทั้งหมดในภูมิภาคเหล่านี้เพิ่มขึ้น การศึกษาจะดำเนินต่อไป

โคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์คือเปอร์เซ็นต์ของเรติคูโลไซต์ที่ขาดโปรตีนป้องกัน CD59

หากมีเรติคูโลไซต์ที่เป็นบวกต่อ CD59 100% การไม่มีโคลน PNH จะถูกตัดสินและมีการวินิจฉัยว่าไม่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal

หากตรวจพบ reticulocytes CD59 เชิงลบในผู้ป่วยที่มีอาการทางคลินิกและค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับมากกว่า 1% จะมีการสรุปการวินิจฉัยเกี่ยวกับการมีอยู่ของโคลน PNH และเพื่อยืนยันการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal การศึกษาเพิ่มเติม แนะนำให้ใช้ตามระเบียบการมาตรฐานสากล (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig , Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards แนวทางปฏิบัติสำหรับ การวินิจฉัยและการติดตามภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal และความผิดปกติที่เกี่ยวข้องโดยโฟลว์ไซโตเมทรี)

หากตรวจพบเรติคูโลไซต์ CD59 เชิงลบและค่าที่ได้รับคือ 0.1-1% การมีอยู่ของโคลน PNH รองจะถูกตัดสิน ในกรณีนี้ ขอแนะนำให้พิจารณาโคลน PNH อีกครั้งหลังจากผ่านไป 6 เดือนเพื่อตรวจสอบมูลค่าที่เพิ่มขึ้นและการพัฒนาของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal

เมื่อยืนยันขนาดโคลนนี้โดยโฟลว์ไซโตเมทรี ตามระเบียบการระหว่างประเทศ จะมีการวินิจฉัยรูปแบบไม่แสดงอาการของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินในเวลากลางคืนแบบพาร็อกซิมัลโดยไม่มีอาการทางคลินิก หรือมีการประเมินโคลน PNH ที่มาพร้อมกับ AA และ MDS เมื่อทำการวินิจฉัยที่เหมาะสมตามคำแนะนำ (กลุ่มความสนใจ PNH ระหว่างประเทศ (ไอ-หมู))

วิธีการดังกล่าวผ่านการทดสอบทางคลินิกที่แผนกการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการทางคลินิกของสถาบันการแพทย์ระดับบัณฑิตศึกษาแห่งรัสเซีย เราตรวจผู้ป่วย 572 รายที่ส่งต่อมาจากสถานพยาบาลต่างๆ ด้วยการวินิจฉัยเบื้องต้นหรือสงสัยว่ามีภาวะเม็ดเลือดแดงแตกออกหากินเวลากลางคืน (PNH), โรคโลหิตจาง aplastic (AA), กลุ่มอาการ myelodysplastic (MPS), โรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิต้านตนเอง (AIHA) อายุตั้งแต่ 12 ถึง 82 ปี

ผู้ป่วยทุกรายได้รับการวินิจฉัยโดยใช้วิธีการที่เสนอโดยใช้ multicolor flow cytometry รวมถึงตามแนวทางมาตรฐานสากล

การไม่มีโปรตีนป้องกัน CD59 บนเมมเบรนของเรติคูโลไซต์ที่แยกได้โดย CD235a (เครื่องหมายแพน - เม็ดเลือดแดง) และ CD71 (ตัวรับทรานสเฟอริน) และบริสุทธิ์เพิ่มเติมโดย gating ตามลำดับตามพารามิเตอร์การกระเจิงของแสง FS / SS ถูกกำหนดความสัมพันธ์สูงของปริมาตร ของโคลน PNH ที่วัดระหว่างเรติคูโลไซต์ได้รับการพิสูจน์ตามวิธีการที่เสนอด้วยโคลน PNH ระหว่างแกรนูโลไซต์และโมโนไซต์ ซึ่งวัดตามแนวทางมาตรฐานสากล

ตรวจร่างกายผู้ที่มีอายุระหว่าง 15 ถึง 64 ปี จำนวน 572 คน โดยเป็นผู้ชาย 248 คน และผู้หญิง 324 คน จากการตรวจสอบ 572 ราย ตรวจพบโคลน PNH ในผู้ป่วย 175 ราย ค่าอยู่ระหว่าง 0.1% ถึง 99.7% (ค่ามัธยฐาน 41.6%) ในจำนวนนี้เป็นชาย 78 ราย และหญิง 97 ราย ผู้ป่วยทุกรายได้รับการศึกษาแบบคู่ขนานของโคลน PNH ตามแนวทางมาตรฐานสากลและใช้วิธีการที่นำเสนอ ความสัมพันธ์ระหว่างค่าโคลน PNH ระหว่างเรติคูโลไซต์และแกรนูโลไซต์เท่ากับ 0.93 ระหว่างเรติคูโลไซต์และโมโนไซต์ 0.95 ตามลำดับ ความไวของวิธีการคือ 98.9% ความจำเพาะ 99.8% ความแม่นยำโดยรวม 99.7%

โดยพื้นฐานแล้วในโรคโลหิตจาง aplastic และกลุ่มอาการ myelodysplastic โคลน PNH จะน้อยกว่า 1% ตามคำแนะนำ จะต้องตรวจสอบโคลนขนาดนี้เมื่อเวลาผ่านไป 1 ครั้งทุกๆ 6 เดือน ด้วยการเพิ่มขนาดของโคลนและอาการทางคลินิกที่สอดคล้องกัน เรากำลังพูดถึงการวินิจฉัย PNH

ตัวอย่าง. ผู้ป่วย ม. อายุ 34 ปี อยู่ภายใต้การดูแลของนักโลหิตวิทยา หลังจากป่วยด้วยการติดเชื้อไวรัสทางเดินหายใจเฉียบพลัน มีอาการอ่อนแรง ดีซ่าน และปัสสาวะสีเข้มเพิ่มขึ้น

ผู้ป่วยเข้ารับการรักษาในแผนกของสถานพยาบาล โดยมีอาการอ่อนแรงและปัสสาวะสีเข้ม

มีการตรวจร่างกายเป็นประจำในแผนกผู้ป่วยนอกของสถานพยาบาล การตรวจสอบตามวัตถุประสงค์เผยให้เห็นน้ำแข็งของผิวหนังและเยื่อเมือกที่มองเห็นได้ ผู้ป่วยเข้ารับการรักษาในแผนกโลหิตวิทยา โดยมีอาการอ่อนแรงทั่วไป อาการไม่สบาย หายใจลำบาก หัวใจเต้นเร็ว ปัสสาวะสีเข้ม และปริมาณฮีโมโกลบินและเม็ดเลือดแดงลดลง

หลอดทดลองที่มีตัวอย่างเลือดบริเวณรอบข้างที่มีความเสถียรของ K2EDTA ถูกส่งไปยังแผนกวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการทางคลินิกของ Russian Medical Academy of Postgraduate Education ไปยังศูนย์อ้างอิงสำหรับการศึกษา PNH เพื่อระบุโคลน PNH โดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรี การวิเคราะห์โคลน PNH ระหว่างแกรนูโลไซต์ โมโนไซต์ และเม็ดเลือดแดงได้ดำเนินการตามระเบียบการระหว่างประเทศ และการศึกษาโคลน PNH ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการที่เสนอกับเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์

ในเวลาเดียวกัน การศึกษาโคลน PNH ได้ดำเนินการตามระเบียบการระหว่างประเทศและตามวิธีการที่เสนอ (การทำซ้ำประโยคก่อนหน้า!) ตามระเบียบการระหว่างประเทศ ตัวอย่างถูกย้อมเพื่อระบุโคลน PNH ระหว่างแกรนูโลไซต์ โมโนไซต์ และเม็ดเลือดแดง และตามวิธีการที่ผู้เขียนเสนอเพื่อระบุโคลน PNH ระหว่างเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ ตามวิธีการที่เสนอ ตัวอย่างถูกย้อมด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีกับ CD235a(FITC)/CD59(PE)/CD71(APC) โดยเติมพวกมันสลับกันกับเลือดครบส่วน 40 ไมโครลิตร เจือจางในอัตราส่วน 1:10

หลังจากการบ่มเป็นเวลา 15 นาทีในความมืด เซลล์ถูกล้างสองครั้งในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 4 มิลลิลิตร โดยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาทีที่ 1500 รอบต่อนาที

หลังจากการปั่นแยกแต่ละครั้ง จะมีการรวบรวมส่วนลอยเหนือตะกอน โดยเหลือเซลล์ไว้ที่ด้านล่างของหลอด

ตัวอย่างที่เตรียมไว้ถูกแขวนลอยอีกครั้งโดยกระแสน้ำวนเป็นเวลา 5 วินาทีและเติม PBS 750 ไมโครลิตร

เพื่อศึกษาเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ พื้นที่ของเม็ดเลือดแดงไม่รวมเศษและดับเบิ้ลต์ถูกเน้นบนกราฟ FSC(log) เทียบกับ SSC(log)

จากนั้น กราฟ FSC(log) เทียบกับ CD235a เน้นเซลล์ที่ให้ผลบวกของ CD235a โดยไม่รวมเศษและเซลล์ที่ไม่ได้เป็นของประชากร CD235a+ ที่จับโมโนโคลนอลแอนติบอดีอย่างไม่จำเพาะกับ CD235a เหตุการณ์ที่รวมอยู่ในเกต CD235a+ ถูกวิเคราะห์บนกราฟ CD71 เทียบกับ FSC(log) ในที่ซึ่งประชากรที่เป็นบวกของ CD71 ถูกระบุ

สำหรับการประเมินตามวัตถุประสงค์ของโคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ มีการรวบรวมเหตุการณ์อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์

ขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟของ FSC(log) กับ SSC(log) ถูกลงจุด จากนั้น บนกราฟนี้ โดยใช้เกต CD71str เพิ่มเติม ประชากรของเรติคูโลไซต์ถูกแยกออก ซึ่งถูกกำจัดออกจากเศษและดับเบิ้ลโดยใช้วิธีการของเกตติ้งตามลำดับ

ถัดไปบนกราฟ CD235a กับ CD59 ขึ้นอยู่กับเกท CD71str (เรติคูโลไซต์ที่แยกได้) เรติคูโลไซต์ได้รับการประเมินสำหรับการมีอยู่ของโปรตีน CD59 ที่ถูกผูกไว้กับ GPI บนเยื่อหุ้มเรติคูโลไซต์ตามลำดับเซลล์ PNH-positive และ PNH-negative ข้อมูลทางสถิติสะท้อนให้เห็นเป็นค่าสัมบูรณ์และ % ของเกต

เมื่อเรติคูโลไซต์ถูกแยกออกโดย CD71 และกำจัดเศษในเวลาต่อมา จำนวนเซลล์ CD59 มีจำนวน 97.6% ดังนั้น เมื่อใช้วิธีการที่นำเสนอ จึงตรวจพบโคลน PNH

การศึกษาตามระเบียบการระหว่างประเทศสำหรับการตรวจหา PNH ยืนยันว่าโคลน PNH มีอยู่ในแกรนูโลไซต์ โมโนไซต์ และเม็ดเลือดแดงในปริมาณ 99.2%, 97.6% และ 71.0% ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ถึงความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์ของข้อเสนอที่เสนอ และวิธีการมาตรฐาน การทดสอบนี้ทำหน้าที่เป็นพื้นฐานสำหรับการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal

การทดลองทางคลินิกแสดงให้เห็นว่าวิธีการที่เสนอมีความน่าเชื่อถือ ความแม่นยำ และความไวสูง (โคลน PNH 0.1%) ช่วยให้สามารถระบุการมีอยู่ของค่าโคลนสูงทั้งสองในผู้ป่วยที่มีภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal และค่ารอง (จาก 0.1 %) ในผู้ป่วยโรคโลหิตจาง aplastic, myelodysplastic syndrome วิธีที่เสนอนั้นใช้งานง่าย ไม่ต้องใช้ต้นทุนวัสดุจำนวนมาก และการทดสอบหนึ่งครั้งใช้เวลา 40-50 นาที

เทคนิคนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการคัดกรองผู้ป่วยและเข้าถึงได้โดยสถาบันการแพทย์หลากหลายโปรไฟล์ตลอดจนประชาชนทุกประเภท

วิธีการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการสำหรับภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal รวมถึงการย้อมสีเลือดทั้งหมดของผู้ป่วยด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต การฟักตัว การล้างเซลล์เม็ดเลือดจากโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ไม่ได้ผูกไว้ด้วยการหมุนเหวี่ยง การแขวนลอยตัวอย่างที่เสร็จแล้วอีกครั้ง การประเมินขนาดของ โคลนหรือการไม่มีอยู่ในโปรแกรมโฟลว์ไซโตมิเตอร์ตามการไม่มีหรือการมีอยู่ของโปรตีนป้องกัน โดยมีคุณลักษณะเฉพาะคือการผสมผสานสามสีของโมโนโคลนอลแอนติบอดี CD235a (FITC)/CD59(PE)/CD71 (APC) ถูกนำมาใช้ในการย้อมสี ตัวอย่างเลือดที่อยู่ระหว่างการศึกษาซึ่งถูกเพิ่มลงในหลอดทดลองพร้อมกับตัวอย่างนั้น การประเมินการมีอยู่ของโคลน PNH ระหว่างเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์นั้นขึ้นอยู่กับการไม่มีโปรตีนป้องกัน CD59 บนเมมเบรนของเรติคูโลไซต์ที่แยกได้โดยเกท CD235a - กระทะ เครื่องหมายของเม็ดเลือดแดงและตัวรับ CD71- ทรานสเฟอร์ริน เพื่อประเมินโคลน PNH ในกลุ่มเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ มีการรวบรวมเหตุการณ์อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์ ขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟ FSC(log) ถูกสร้างขึ้นเทียบกับ SSC(log) โดยที่เรติคูโลไซต์ ถูกแยกออกโดยใช้เกต CD71str เพิ่มเติม ดังนั้นจึงทำให้ประชากรเรติคูโลไซต์บริสุทธิ์จากเศษซากและดับเบิ้ลโดยใช้วิธีการเกตตามลำดับ ค่าตัวบ่งชี้ที่ได้รับจะถูกเปรียบเทียบกับเกณฑ์ปกติ และเมื่อมีเรติคูโลไซต์เชิงบวก CD59 100% จะไม่มี PNH ได้รับการตัดสิน -โคลนและวินิจฉัยว่าไม่มีโรค paroxysmal hemoglobinuria ออกหากินเวลากลางคืน; หากตรวจพบ reticulocytes CD59 เชิงลบในผู้ป่วยที่มีอาการทางคลินิกและค่าของตัวชี้วัดที่ได้รับมากกว่า 1% จะมีการสรุปการวินิจฉัยเกี่ยวกับการมีอยู่ของ โคลน PNH และเพื่อยืนยันการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal แนะนำให้ศึกษาเพิ่มเติมตามโปรโตคอลมาตรฐานสากล หากตรวจพบเรติคูโลไซต์เชิงลบ CD59 และค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับคือ 0.1-1% การมีอยู่ของผู้เยาว์ โคลน PNH ได้รับการตัดสินและแนะนำให้พิจารณาอีกครั้งของโคลน PNH หลังจากผ่านไป 6 เดือนเพื่อเพิ่มมูลค่าและการพัฒนาของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal หากได้รับการยืนยันขนาดนี้ โคลนได้รับการวินิจฉัยว่ามีรูปแบบไม่แสดงอาการของฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal โดยไม่มีทางคลินิก สัญญาณ

สิทธิบัตรที่คล้ายกัน:

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือจักษุวิทยา และสามารถใช้สำหรับการวินิจฉัยโรคปลายประสาทอักเสบทางพันธุกรรม (HON) ในการทำเช่นนี้ การศึกษาทางคลินิกและเซลล์วิทยาได้ดำเนินการ และยังได้เพาะเลี้ยงไฟโบรบลาสต์ที่มีความหนาแน่น 5,000-10,000 เซลล์ต่อลูกบาศก์เซนติเมตร จากผิวหนังของผู้ป่วยและย้อมด้วยสีย้อมเรืองแสงที่ขึ้นกับแรงดันไฟฟ้าของไมโตคอนเดรีย TMRE จนถึงความเข้มข้นสุดท้าย 25 นาโนโมลาร์

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์และอธิบายสารเคมีที่เรืองแสงเพื่อระบุการมีอยู่และ/หรือปริมาณของสารที่วิเคราะห์ในตัวอย่างที่มีปริมาณที่คาดหวังของสารที่วิเคราะห์ โดยที่สารรีเอเจนต์จะไม่กระจายตัวและละลายได้ในตัวกลางที่เป็นน้ำและมีสารคู่ในการจับ สำหรับสารวิเคราะห์และองค์ประกอบเคมีเรืองแสงที่มีสารประกอบโอเลฟินและโลหะคีเลต โดยที่สารประกอบโอเลฟินิกเป็นสารประกอบที่สามารถทำปฏิกิริยากับออกซิเจนเสื้อกล้ามในการเติม 2+2 ให้เกิดไดออกซีเทน หรือที่สามารถทำปฏิกิริยากับออกซิเจนเสื้อกล้ามใน การเติมไซโคล 4+2 ด้วยไดอีน และโดยที่โลหะหรือโลหะคีเลตคือโลหะแรร์เอิร์ธหรือโลหะกลุ่ม VIII และโดยที่โลหะประสานกับอะตอมตั้งแต่สองอะตอมขึ้นไปของโมเลกุลหรือสารคีเลตเดียวกัน โดยมีอะตอมตั้งแต่สองอะตอมขึ้นไป คัดเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยออกซิเจน ไนโตรเจน และซัลเฟอร์

กลุ่มสิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ วิทยาภูมิคุ้มกัน และสามารถใช้เพื่อกำหนดประสิทธิผลของการรักษาโรคมะเร็งจากร่างกายภายนอกได้ เพื่อทำเช่นนี้ หลังจากการบริหารให้องค์ประกอบภูมิคุ้มกันหนึ่งขนาดหรือมากกว่าแก่ผู้รับการทดลอง ระดับของทีลิมโฟไซต์ที่ถูกกระตุ้น (CD3+ CD69+) ในร่างกายจะถูกวัด

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาเทคโนโลยีชีวภาพ และสามารถใช้เพื่อระบุจีโนไทป์ของมนุษย์โดยความหลากหลายในยีนเมทริกซ์เมทัลโลโปรตีนเนส MMP9-1562 C>T (rs3918242)

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับวิธีการตรวจวัดฤทธิ์ทางชีวภาพของไข่ Trichuris ที่ตัวอ่อนแล้ว วิธีการที่อธิบายไว้ประกอบด้วยการดำเนินการวิเคราะห์อย่างน้อย 3 รายการที่เลือกจาก: - การประเมินและ/หรือการยืนยันระยะการพัฒนาของตัวอ่อนของไข่โดยใช้วิธี PCR เชิงปริมาณโดยใช้ลำดับเครื่องหมายที่เหมาะสมเพื่อกำหนดจำนวนสำเนาของ DNA จีโนม - การประเมิน กิจกรรมการเผาผลาญของไข่ตัวอ่อนโดยใช้วิธีทางชีวเคมีและ/หรืออณูชีววิทยา - การประเมินความไม่สามารถของการแสดงออกของยีนในไข่ตัวอ่อน - การประเมินการเคลื่อนที่ของตัวอ่อน Trichuris โดยใช้กล้องจุลทรรศน์ในการสังเกตเป็นระยะเวลานานหลังจากการฟักตัวล่วงหน้าที่อุณหภูมิสูงและ/หรือ - การประเมินอัตราการฟักไข่ของตัวอ่อน Trichuris ในสัตว์ทดลอง

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ วิทยาโรคหัวใจ และสามารถใช้เพื่อทำนายความเสี่ยงของการเสียชีวิตจากโรคหลอดเลือดหัวใจในผู้ป่วยที่เป็นภาวะหัวใจล้มเหลวเรื้อรังหลังกล้ามเนื้อหัวใจตายร่วมกับเบาหวานชนิดที่ 2

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ เนื้องอกวิทยาและชีวเคมีคลินิก สาระสำคัญของวิธีการนี้คือ เซลล์เม็ดเลือดที่อยู่รอบข้างคงที่จะได้รับการบำบัดด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิต่อโปรตีนที่จับกับเอสโตรเจน ซึ่งมีปฏิกิริยาเฉพาะกับแอนติเจนบนพื้นผิวของแกรนูโลไซต์ที่แบ่งส่วน จากนั้นแอนติบอดีต่อต้านสายพันธุ์ทุติยภูมิที่มีป้ายกำกับเรืองแสงจะถูกเพิ่มเข้าไปในแอนติเจน-แอนติบอดีที่ได้ ซับซ้อนและหากมีการย้อมสีที่พื้นผิวของ granulocytes ที่แบ่งส่วน granulocytes จะได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นเนื้องอกมะเร็งและในกรณีที่ไม่มีการย้อมสีที่พื้นผิวของ granulocytes ที่แบ่งส่วนจะมีการวินิจฉัยเนื้องอกที่อ่อนโยน

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาการแพทย์ กล่าวคือ เนื้องอกวิทยา และสามารถใช้เพื่อทำนายการพัฒนาของการแพร่กระจายของเม็ดเลือดหลังการรักษามะเร็งไตร่วมกัน

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ สูติศาสตร์และนรีเวชวิทยา และสามารถใช้เพื่อทำนายการชะลอการเจริญเติบโตของมดลูก ในการดำเนินการนี้ ปริมาณสัมพัทธ์ของลิมโฟไซต์ CD3+CD16+56+ ระดับส่วนประกอบเสริม C3 และตัวรับปัจจัยการตายของเนื้องอกที่ละลายน้ำได้ (sTNF-R) จะถูกกำหนดในเลือดดำของผู้หญิงในการตั้งครรภ์ระยะแรก

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ ระบบทางเดินอาหาร และสามารถใช้สำหรับการวินิจฉัยภาวะถุงน้ำเทียมหลังเนื้อตายของตับอ่อนได้ เมื่อต้องการทำเช่นนี้ กิจกรรมของเซลล์ฟาโกไซต์ในเลือดของผู้ป่วยจะถูกกำหนดโดยระดับการแสดงออกของ CD 14+/HLA-DR+ โดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรีและการวิเคราะห์ ROC ทางสถิติ เมื่อปริมาณ CD14+/HLA-DR+ ต่ำกว่า 85% จะมีการวินิจฉัยว่ามีถุงน้ำเทียมในตับอ่อนหลังการตายของเซลล์ การใช้วิธีการนี้ทำให้สามารถวินิจฉัย pseudocyst ของตับอ่อนหลังการตายของตับอ่อนได้ซึ่งทำให้สามารถกำหนดกลยุทธ์การจัดการของผู้ป่วยดังกล่าวและเลือกการแทรกแซงการผ่าตัดได้ 2 หน้า, 1 แท็บ

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ เนื้องอกวิทยา และสามารถใช้เพื่อทำนายการพัฒนาของการอยู่รอดที่ไม่มีการกำเริบของโรคในคนไข้ที่เป็นมัลติเพิล มัยอีโลมา หลังการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแบบออโตโลกัส จุดประสงค์ของการประดิษฐ์คือเพื่อทำให้วิธีการพยากรณ์การรอดชีวิตที่ปราศจากการกลับเป็นซ้ำง่ายขึ้นในผู้ป่วยที่มีมัลติเพิลมัยอีโลมาหลัง AHSCT วิธีการทำนายการอยู่รอดที่ปราศจากการกำเริบของโรคในผู้ป่วยที่มีมัลติเพิลมัยอีโลมาหลังการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแบบออโตโลกัส (AHCT) รวมถึงโฟลว์ไซโตเมทรีและการประเมินปริมาณสัมพัทธ์ของหนึ่งในประชากรลิมโฟไซต์โดยใช้ค่าขีดจำกัดของมัน ในวิธีการที่เสนอ หลังจากขั้นตอน apheresis ก่อนการปลูกถ่าย จำนวนสัมพัทธ์ของเซลล์ CD45+CD19+ B จะถูกกำหนดในผลิตภัณฑ์ apheresis ของผู้ป่วย และหากเนื้อหาของเซลล์ CD45+CD19+ B มากกว่า 2.5% ระยะเวลาที่สั้นกว่าของ การอยู่รอดโดยปราศจากการกำเริบของโรคหลังจากคาดการณ์ AHSCT และหากเนื้อหาเป็นเซลล์ CD45 +CD19+ B น้อยกว่า 2.5% ทำนายการอยู่รอดโดยปราศจากโรคได้นานขึ้นหลังจาก AHSCT ป่วย 1 ราย

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาการแพทย์ กล่าวคือวิทยาภูมิคุ้มกัน และสามารถใช้เพื่อประเมินปฏิกิริยาการเปลี่ยนแปลงแบบลาสต์ของเซลล์ลิมโฟไซต์ เพื่อจุดประสงค์นี้ brucellin ใช้สำหรับการกระตุ้นเซลล์เม็ดเลือดขาวโดยเฉพาะ การตรวจหารูปแบบการระเบิดของลิมโฟไซต์ดำเนินการโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีกับ CD34 ตามด้วยการนับจำนวนเซลล์โดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรี การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถนับจำนวนลิมโฟไซต์ที่กระตุ้นบรูเซลลินใน RBTL โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดี CD34 ในผู้ป่วยที่เป็นโรคบรูเซลโลซิสและผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี 1 โต๊ะ

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือวิทยาภูมิคุ้มกัน และสามารถใช้เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อ HLA-G ที่เป็นอัลโลจีนิกในซีรัมเลือด ในการดำเนินการนี้ ให้ใช้การทดสอบการจับคู่ระหว่างเซลล์โมโนนิวเคลียร์ของผู้บริจาคและซีรั่มของผู้รับ ประชากรย่อยของเซลล์โมโนนิวเคลียร์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรีสำหรับการจับของโมโนโคลนอลแอนติบอดี HLA-G และระดับของการแสดงออกของ HLA-G ได้รับการประเมินในเซลล์โมโนนิวเคลียร์ของผู้บริจาคที่ทดลองและควบคุม ในกรณีนี้ ประชากรย่อย CD3-HLA-G+ และ CD3+HLA-G+ มีนัยสำคัญ โดยค่าสัมประสิทธิ์การปราบปราม (SC) ในการตั้งค่าการทดลองที่เกี่ยวข้องกับส่วนควบคุมคำนวณโดยใช้สูตร: SR HLA-G = (H L A − G O P − H L A − G K O N T) H L A − G K O N T × 100 โดยที่ HLA-Gop คือจำนวนสัมพัทธ์รวมของประชากรย่อยที่แสดง HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) ในสภาวะการทดลอง % ; HLA-Gcont - จำนวนสัมพัทธ์ทั้งหมดของประชากรย่อยซึ่งแสดงออก HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) ในการตั้งค่าการควบคุม, % ในกรณีนี้ การมีอยู่ของความไวต่อ allogeneic HLA-G จะได้รับการวินิจฉัยว่ามีค่า KPHLA-G เป็นลบ การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถตรวจจับอาการแพ้จากสารอัลโลจีนิกต่อ HLA-G โดยใช้โฟลว์ไซโตเมทรี โดยกำหนดประชากรย่อย CD3-HLA-G+ และ CD3+HLA-G+ 3 ราคา, 3 ป่วย, 2 แท็บ

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาการแพทย์ กล่าวคือ สูติศาสตร์และนรีเวชวิทยา และสามารถใช้เพื่อทำนายการกลับเป็นซ้ำของการแท้งบุตรที่ถูกคุกคาม ในการทำเช่นนี้การศึกษาทางภูมิคุ้มกันวิทยาของเลือดดำบริเวณรอบข้างจะดำเนินการในช่วงตั้งครรภ์ 7-12 สัปดาห์ในสตรีที่เสี่ยงต่อการแท้งบุตร หลังจากการรักษาภัยคุกคามของการแท้งบุตร จะมีการพิจารณาปริมาณ CD45RA-CD62L- ในประชากรของลิมโฟไซต์ CD8+ เมื่อค่าของมันมากกว่า 23.9% จะมีการทำนายการเกิดการแท้งบุตรที่คุกคามในไตรมาสที่สองในผู้หญิงที่มีประวัติการแท้งซ้ำ การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถคาดการณ์การกลับเป็นซ้ำของการแท้งบุตรที่ถูกคุกคามในไตรมาสที่สองของการตั้งครรภ์ซึ่งจะช่วยให้สามารถเลือกกลวิธีที่ถูกต้องในการจัดการหญิงตั้งครรภ์และลดอุบัติการณ์ของภาวะแทรกซ้อนนี้ 1 แท็บ 4 อเวนิว

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ วิทยาการถ่ายเลือด และสามารถใช้เพื่อติดตามประสิทธิผลของการฉายรังสีจากเลือดของผู้บริจาค วิธีการนี้รวมถึงการจัดเตรียมปฏิกิริยาการเปลี่ยนแปลงแบบระเบิดของเซลล์เม็ดเลือดด้วยไมโทเจน ไฟโตฮีมักกลูตินิน และคำนึงถึงผลลัพธ์ของปฏิกิริยาโดยการกำหนดดัชนีการกระตุ้นลิมโฟไซต์ ปฏิกิริยาดำเนินการโดยสัมพันธ์กับเลือดของผู้บริจาคที่ได้รับการฉายรังสี ผลลัพธ์จะถูกบันทึกโดยใช้โฟลว์ไซโตฟลูออริมิเตอร์โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีป้ายกำกับด้วยฟลูออโรโครมที่แตกต่างกัน การเข้าออกของลิมโฟไซต์ที่ถูกกระตุ้นด้วยการแสดงออกที่ลดลงของเครื่องหมายเม็ดเลือดขาวทั่วไป CD45 และการหาเปอร์เซ็นต์ของ T ที่เป็นลบสองเท่า -ลิมโฟไซต์ที่มีอิมมูโนฟีโนไทป์ CD3+ อยู่ด้วย ในขณะที่ตัวอย่างเลือดเดียวกันที่ไม่ได้รับการฉายรังสีจะถูกควบคุม หลังจากนั้นประสิทธิผลของการฉายรังสีจะถูกกำหนดโดยอัตราส่วนของเนื้อหาของ T-lymphocytes ที่เป็นลบสองเท่ากับอิมมูโนฟีโนไทป์ CD3+CD4-CD8- ในเลือดควบคุมที่ได้รับการฉายรังสีที่ทดสอบและไม่ได้รับการฉายรังสีเช่นเดียวกับ Eob=Sdntlo-Sdntlk โดยที่ Eob คือประสิทธิผลของการฉายรังสี Cdntlo คือเปอร์เซ็นต์ของเนื้อหาที่ซ้ำกัน T-lymphocytes ที่มีอิมมูโนฟีโนไทป์ CD3+CD4-CD8- ในการทดลอง (ในเลือดที่ผ่านการฉายรังสีที่ทดสอบ) Cdntlk - เปอร์เซ็นต์ของ T- ลิมโฟไซต์ที่มีอิมมูโนฟีโนไทป์ CD3+CD4-CD8- ในกลุ่มควบคุม (ในตัวอย่างเลือดเดียวกันที่ไม่ได้รับการฉายรังสี) หากความแตกต่างกับกลุ่มควบคุมมากกว่า 50% จะมีการสรุปข้อสรุปเกี่ยวกับความด้อยการทำงานของ T-lymphocytes ในเลือดที่ได้รับรังสีและความปลอดภัยทางภูมิคุ้มกันของผลิตภัณฑ์เลือดนี้สำหรับผู้รับ การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถตรวจสอบประสิทธิผลของการฉายรังสีของเลือดผู้บริจาคโดยใช้โฟลไซโตเมทรี

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ สูติศาสตร์และนรีเวชวิทยา และทำให้สามารถคาดการณ์ภัยคุกคามการแท้งบุตรล่าช้าในสตรีมีครรภ์ได้ เมื่อต้องการทำเช่นนี้ เมื่ออายุครรภ์ 5-12 สัปดาห์ จะมีการกำหนดจำนวนสัมพัทธ์ของโมโนไซต์ขณะตั้งครรภ์ CD178+ ในเลือดดำส่วนปลาย เมื่อค่าของมันเท่ากับ 37.7% หรือน้อยกว่าใน monocytic gate การแท้งบุตรล่าช้าที่คุกคามจะเกิดขึ้นในสตรีที่มีการแท้งบุตรเร็วที่ถูกคุกคามและมีประวัติการแท้งซ้ำอีก การใช้วิธีนี้ทำให้คุณสามารถเลือกกลยุทธ์การจัดการการตั้งครรภ์ที่เหมาะสม ดำเนินมาตรการรักษาและป้องกัน และลดความเสี่ยงของภาวะแทรกซ้อนและผลลัพธ์ที่ไม่พึงประสงค์จากการตั้งครรภ์ในกลุ่มผู้หญิงที่มีความเสี่ยงสูงต่อการแท้งบุตร 3 อเวนิว, 1 แท็บ

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ สูติศาสตร์ และเกี่ยวข้องกับการเลือกกลวิธีในการจัดการหญิงตั้งครรภ์ที่มีภาวะรกไม่เพียงพอและกลุ่มอาการจำกัดการเจริญเติบโตของทารกในครรภ์ (FGR) เพื่อจุดประสงค์นี้ ในผู้ป่วยที่มีภาวะ fetoplacental ไม่เพียงพอและ FGR กิจกรรมของ superออกไซด์ dismutase เนื้อหาของปัจจัยการเจริญเติบโตของรก เอนโดลิน และเมลาโทนินจะถูกกำหนดในซีรั่มในเลือดโดยใช้วิธีเอนไซม์อิมมูโนแอสเสย์ จากตัวบ่งชี้เหล่านี้ ค่าสัมประสิทธิ์การพยากรณ์โรค P คำนวณโดยใช้สูตร: P = (0.0001*COD+0.0255*Mel+0.1636*CD105+(-0.0487*PGF)-8.5389 โดยที่ COD คือซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเทส, pg/ ml, Mel - เมลาโทนิน, pg/ml, CD 105 - เอนโดลิน, pg/ml, PGF - ปัจจัยการเจริญเติบโตของรก, pg/ml ที่มีค่า P 0.64 ขึ้นไป มีความเสี่ยงสูงที่จะเกิดภาวะวิกฤตของทารกในครรภ์ในช่วงฝากครรภ์คือ ซึ่งจำเป็นต้องยุติการตั้งครรภ์โดยการผ่าตัดคลอดฉุกเฉินเพื่อประโยชน์ของทารกในครรภ์ วิธีการนี้ช่วยเพิ่มความแม่นยำในการทำนายภาวะวิกฤติของทารกในครรภ์ ซึ่งช่วยให้สามารถเลือกกลยุทธ์ที่เหมาะสมในการจัดการผู้ป่วยได้ทันท่วงที

สิ่งประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับสาขาการแพทย์ กล่าวคือ โสตศอนาสิกวิทยา และสามารถใช้สำหรับการวินิจฉัยแยกโรคแบบเฉียบพลันของต่อมทอนซิลอักเสบเฉียบพลันจากไวรัสและแบคทีเรียในผู้ใหญ่ ในการทำเช่นนี้ จะมีการรวบรวมเลือดบริเวณรอบข้างและกำหนดเนื้อหาสัมพัทธ์ของประชากรย่อยของนิวโทรฟิลแกรนูโลไซต์พร้อม ๆ กันที่แสดง CD16 และ CD11b บนเมมเบรนพื้นผิว การมีอยู่ของประชากรย่อย CD16brightCD11bdimNG% จาก 80 ถึง 99.9% โดยมีความหนาแน่นสูงของการแสดงออกของ CD16 และความหนาแน่นต่ำของการแสดงออก CD11b เป็นที่ยอมรับตามปกติ หากตรวจพบประชากรย่อยของ CD16brightCD11bbrightNG หรือ CD16dimCD11bbrightNG ในปริมาณ 40% ขึ้นไป จะพิจารณาการติดเชื้อไวรัสเฉียบพลันหรือการติดเชื้อแบคทีเรียเฉียบพลันตามลำดับ การใช้วิธีนี้ช่วยให้เรามั่นใจในความแม่นยำของการวินิจฉัยแยกโรคต่อมทอนซิลอักเสบเฉียบพลันจากไวรัสและแบคทีเรียในผู้ใหญ่ 3 อเวนิว, 1 แท็บ

กลุ่มของสิ่งประดิษฐ์เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ การวินิจฉัยในห้องปฏิบัติการ และสามารถใช้ในการระบุตัวแทนของกลุ่มจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคในมนุษย์และสัตว์ได้พร้อมกัน มีลักษณะเฉพาะโดยการใช้การทดสอบแถบอิมมูโนโครมาโตกราฟีอย่างน้อยห้าชุดที่อยู่ในตัวเดียว ในเวลาเดียวกันในช่องที่หนึ่งและที่สองของร่างกายอุปกรณ์จะมีการทดสอบแถบเพื่อระบุสารพิษในช่องที่สาม - การทดสอบแถบเพื่อระบุรูปแบบพืชของแบคทีเรียในรูปแบบที่สี่ - สปอร์ของแบคทีเรียและใน ประการที่ห้า - การทดสอบแถบเพื่อระบุสารอาหารสำหรับการปลูกฝังไวรัสและโรคริกเก็ตเซีย การทดสอบดำเนินการโดยการวางตัวของการทดสอบแถบอิมมูโนโครมาโตกราฟีลงในถุง Zeflen ที่เป็นฉนวนความร้อน ซึ่งประกอบด้วย Zeflen สองชั้น โดยมีปะเก็นฉนวนความร้อนที่ทำจากวัสดุฉนวนความร้อนที่มีรูพรุนอยู่ระหว่างพวกมัน และตัวของการทดสอบแถบอิมมูโนโครมาโตกราฟี ภายในถุงจะถูกให้ความร้อนด้วยแหล่งความร้อนคงที่ และช่องเปิดของถุงจะถูกปิดด้วยแคลมป์เชิงกล และถือว่าช่วงเวลานี้เป็นจุดเริ่มต้นของการทดสอบ มีการเสนออุปกรณ์สำหรับการวิเคราะห์อิมมูโนโครมาโตกราฟีด้วย กลุ่มสิ่งประดิษฐ์ทำให้สามารถเพิ่มผลผลิตของการวิเคราะห์อิมมูโนโครมาโตกราฟีได้ ขยายช่วงอุณหภูมิของการวิเคราะห์อิมมูโนโครมาโตกราฟีจากลบ 20 เป็นบวก 50°C ลดเวลาในการรับผลลัพธ์เป็น 10 นาที เมื่อเทียบกับการวิเคราะห์ที่อุณหภูมิห้อง (20 นาที) โดยมีเงื่อนไขว่าต้องใช้ความไวเท่ากัน และเพิ่มความไวของการวิเคราะห์เมื่อเปรียบเทียบกับการวิเคราะห์ที่ดำเนินการที่อุณหภูมิห้อง 2 น. และเงินเดือน 7 อัตรา f-ly, 5 ป่วย, 4 โต๊ะ, 8 pr.

การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับการแพทย์ กล่าวคือ การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ และสามารถใช้สำหรับการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืนแบบ paroxysmal เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ตัวอย่างเลือดที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะถูกย้อมด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดี CD235a CD59CD71 การมีอยู่ของโคลน PNH ในเม็ดเลือดแดงและเรติคูโลไซต์ได้รับการประเมินโดยการไม่มีโปรตีนป้องกัน CD59 บนเยื่อหุ้มของเรติคูโลไซต์ที่แยกได้โดยเกต CD235a - เครื่องหมายแพน - เม็ดเลือดแดงและ CD71 - ตัวรับการถ่ายโอน เพื่อประเมินโคลน PNH ระหว่างเรติคูโลไซต์ในเกต CD71+ มีการรวบรวมเหตุการณ์อย่างน้อย 20,000 เหตุการณ์ ขึ้นอยู่กับเกต CD71+ กราฟ FSC เทียบกับ SSC ถูกสร้างขึ้น โดยที่เรติคูโลไซต์ถูกแยกออกโดยใช้เกต CD71str เพิ่มเติม ดังนั้นการเคลียร์ประชากรเรติคูโลไซต์จาก เศษและดับเบิ้ลโดยใช้วิธี sequential gating หากมีเรติคูโลไซต์ที่เป็นบวกต่อ CD59 100 ตัว จะตัดสินว่าไม่มี PNH clone และได้รับการวินิจฉัยว่าไม่มี paroxysmal nocturnal hemoglobinuria หากตรวจพบ reticulocytes CD59 เชิงลบในผู้ป่วยที่มีอาการทางคลินิกและค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับมากกว่า 1 จะมีการสรุปการวินิจฉัยเกี่ยวกับการมีอยู่ของโคลน PNH และเพื่อยืนยันการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal การศึกษาเพิ่มเติมคือ แนะนำตามระเบียบการมาตรฐานสากล หากตรวจพบเรติคูโลไซต์เชิงลบ CD59 และค่าของตัวบ่งชี้ที่ได้รับคือ 0.1-1 การมีอยู่ของโคลน PNH รองจะถูกตัดสินและขอแนะนำให้พิจารณาโคลน PNH อีกครั้งหลังจาก 6 เดือนเพื่อตรวจสอบการเพิ่มขึ้นของมูลค่า และการพัฒนาของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal และหากขนาดโคลนนี้ได้รับการยืนยัน จะมีการวินิจฉัยรูปแบบไม่แสดงอาการของฮีโมโกลบินนูเรียในเวลากลางคืนแบบ paroxysmal โดยไม่มีอาการทางคลินิก การใช้เกทหลายพารามิเตอร์ของเซลล์ CD71+ ทำให้สามารถแยกเศษ ดับเบิ้ลต์ และโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จับอย่างไม่จำเพาะออกจากการวิเคราะห์ ป่วย 1 ราย

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria เป็นพยาธิสภาพที่รุนแรงของกลุ่มโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตก โรค Marchiafava-Miceli หรือโรคStrübing-Marchiafava ชื่ออื่นสำหรับพยาธิวิทยานี้ทำให้เกิดการทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดง โรคนี้พบได้น้อยมากต่อประชากร 500,000 คนอาจมี 1 คนที่เป็นโรคนี้

เพื่อไม่ให้กังวลเกี่ยวกับการพัฒนาของภาวะแทรกซ้อนที่เป็นไปได้และผลที่ตามมาของพยาธิวิทยาคุณควรรู้ว่าการวินิจฉัยโรคฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal แสดงถึงอาการและการรักษาทางพยาธิวิทยาอย่างไร

สาเหตุของฮีโมโกลบินนูเรีย

ดังที่ได้กล่าวไว้ข้างต้น hemoglobinuria ออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal เป็นโรคที่หายากมากยิ่งกว่านั้นพยาธิวิทยามักพบในผู้ที่มีอายุ 20 ถึง 40 ปี กรณีของการพัฒนาของโรคในวัยชราหรือในเด็กเป็นที่ทราบกันดีอยู่แล้วในทางการแพทย์ แต่มีส่วนแบ่งเพียงเล็กน้อย

สาเหตุของภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน (PNH) แบบ paroxysmal ถือเป็นปฏิกิริยาการกลายพันธุ์ของยีนสเต็มเซลล์ (PIG-A) ซึ่งเป็นส่วนประกอบของโครโมโซม X ในไขกระดูก เพื่อตอบสนองต่ออิทธิพลของปัจจัยที่มีอิทธิพลที่ไม่สามารถระบุได้ แหล่งข้อมูลบางแห่งอ้างว่าไม่ทราบสาเหตุที่ทำให้เกิดการกลายพันธุ์ของยีน

คนอื่นๆ แย้งว่าฮีโมโกลบินนูเรียสามารถเกิดขึ้นได้จากภูมิหลังของโรคติดเชื้อ โรคปอดบวม การบาดเจ็บ ความมึนเมา อุณหภูมิร่างกายลดลง และแผลไหม้ และแม้แต่ความเครียดทางร่างกายอย่างรุนแรง

แต่ความเห็นที่เป็นเอกฉันท์เกี่ยวกับสาเหตุของพยาธิวิทยายังไม่ได้รับการจัดตั้งขึ้น

มีการเปิดเผยความเชื่อมโยงที่ชัดเจนระหว่างการพัฒนาการวินิจฉัยภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ซึ่งเป็นอาการของโรคที่เกิดขึ้นพร้อมกัน การศึกษาทางการแพทย์ได้พิสูจน์แล้วว่า PNH พัฒนาเป็นผลมาจากโรคโลหิตจาง aplastic และโรคอื่น ๆ ของระบบหลอดเลือดใน 30% ของกรณี

ข้อโต้แย้งที่รู้จักกันดีคือแม้แต่เซลล์ที่กลายพันธุ์เพียงเซลล์เดียวก็สามารถนำไปสู่การพัฒนาสภาพทางพยาธิวิทยาในรูปแบบที่รุนแรงได้ ในระหว่างการก่อตัวของเซลล์เม็ดเลือดแดงซึ่งเกิดขึ้นในไขกระดูก เซลล์ต้นกำเนิดจะแบ่งตัว เจริญเติบโตเต็มที่ และถูกปล่อยเข้าสู่กระแสเลือด ยีนที่ถูกดัดแปลงหนึ่งยีนจะถูกแบ่งออกเป็นคู่อื่น และยีนเหล่านั้นออกเป็นอีกคู่หนึ่ง เป็นต้น กล่าวคือ เซลล์หนึ่งจะจำลองตัวเองในตัวเอง โดยค่อยๆ เติมเลือดด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เสียหาย

สาระสำคัญของความเสียหายของเซลล์เม็ดเลือดแดงคือเยื่อหุ้มโปรตีนที่ไม่สมบูรณ์หรือหายไป ซึ่งทำหน้าที่ปกป้องเซลล์จากระบบภูมิคุ้มกัน เมื่อมีข้อบกพร่องเพียงเล็กน้อยในเซลล์ ภูมิคุ้มกันของร่างกายจะทำลายเซลล์นั้น ส่งผลให้เกิดการวินิจฉัย เช่น ภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ซึ่งเป็นการทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงในหลอดเลือด ซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือการปล่อยฮีโมโกลบินบริสุทธิ์เข้าสู่กระแสเลือด

กระบวนการเดียวกันนี้เกิดขึ้นในภาวะโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกเรื้อรัง ดังนั้น paroxysmal hemoglobinuria ออกหากินเวลากลางคืนจึงเป็นแบบอะนาล็อกหรือตามที่ผู้ประกอบวิชาชีพทางการแพทย์มักอ้างว่าเป็นรูปแบบที่ได้มาแบบเฉียบพลัน ความแตกต่างหลักและเพียงอย่างเดียวระหว่างโรคเหล่านี้คือหลักการของการพัฒนา

โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกเป็นพยาธิสภาพที่มีมา แต่กำเนิดและได้รับฮีโมโกลบินนูเรีย ความบกพร่องของเซลล์เม็ดเลือดแดงยังสามารถขยายไปสู่องค์ประกอบแข็งอื่นๆ ของของเหลวในหลอดเลือดได้ เช่น เม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือด

อาการของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน

อาการของโรค Marchiafava-Micheli ขึ้นอยู่กับการจำแนกสาเหตุของพยาธิสภาพ ตามที่พบว่าโรคนี้สามารถเป็นอิสระได้ดังนั้นรูปแบบ PNH ที่ไม่ทราบสาเหตุจึงมีความโดดเด่น เนื่องจากการพัฒนาทางพยาธิวิทยากับพื้นหลังของโรคโลหิตจาง aplastic ทำให้ hemoglobinuria ออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal อยู่ในรูปแบบของกลุ่มอาการ รูปแบบที่หายากที่สุดถือเป็นรูปแบบสำนวนของ PNH ซึ่งเกิดขึ้นกับพื้นหลังของเม็ดเลือดแดง hypoplasia

ไม่สามารถระบุอาการที่ชัดเจนของโรคใดๆ ได้ เนื่องจากมีความแปรปรวนมาก การดำเนินโรคอาจไม่แสดงอาการภายนอก ในกรณีนี้ พยาธิวิทยาสามารถระบุได้จากการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการเท่านั้น ผู้ป่วยรายอื่นจะมีอาการโลหิตจางรุนแรง

โดยทั่วไป มีความเป็นไปได้ที่จะกำหนดลักษณะทั่วไปเล็กน้อยของอาการที่เป็นไปได้ทั้งหมดของฮีโมโกลบูเรียออกหากินเวลากลางคืน โดยเน้นที่ภาพอาการหลัก

• กระบวนการของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก (การทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงและฮีโมโกลบิน) เกิดขึ้นส่วนใหญ่ในเวลากลางคืน (ฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน) ดังนั้นเมื่อปัสสาวะในตอนเช้าสีของปัสสาวะจะกลายเป็นสีน้ำตาลเข้ม ในเวลากลางวันและเย็นจะไม่เห็นสัญลักษณ์นี้
• เนื่องจากเซลล์เม็ดเลือดแดงลดลงในเชิงปริมาณจึงทำให้เกิดโรคโลหิตจาง อาการของมันเกี่ยวข้องโดยตรงกับความอดอยากของออกซิเจนในอวัยวะและเนื้อเยื่อ ดังนั้นผู้ป่วยอาจมีอาการปวดหัว เวียนศีรษะ มีจุดด่างดำต่อหน้าต่อตา อ่อนแรงทั่วไป อ่อนเพลีย การโจมตีของโรคหลอดเลือดหัวใจตีบและอิศวร

• หากเกิดโรคติดเชื้อเลือดออกการออกกำลังกาย ฯลฯ ร่วมกันอาจเกิดวิกฤตเม็ดเลือดแดงแตกซึ่งแสดงออกโดยการเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วของปริมาณฮีโมโกลบินในของเหลวในหลอดเลือดรวมถึงอาการป่วยไข้อย่างรุนแรงไข้ปวดกระดูกโรคดีซ่านของ ผิวหนังและม้ามโตปานกลางอาจปรากฏขึ้น ( ม้ามโต).
• ฮีโมโกลบินนูเรียจะมาพร้อมกับการละเมิดความเข้มข้นของไนตริกออกไซด์ในพลาสมาซึ่งทั้งกับเบื้องหลังของวิกฤตการณ์และในกรณีทางพยาธิวิทยาที่รุนแรงทำให้เกิดภาวะหย่อนสมรรถภาพทางเพศในผู้ชาย
• เนื่องจากความบกพร่องในเกล็ดเลือด (เซลล์เม็ดเลือดที่ทำให้เกิดการแข็งตัวของเลือด) อาจมีลิ่มเลือดเกิดขึ้น ซึ่งมักพบในหลอดเลือดดำ กระบวนการเดียวกันนี้สามารถถูกกระตุ้นโดยสารที่ถูกปล่อยออกมาเมื่อเซลล์เม็ดเลือดแข็งถูกทำลาย มันทำให้การแข็งตัวของของเหลวในหลอดเลือดเพิ่มขึ้นซึ่งเป็นตัวกำหนดแนวโน้มที่จะเกิดลิ่มเลือดอุดตัน การละเมิดดังกล่าวอาจนำไปสู่ความตายได้

อาการที่ชัดเจนที่สุดของภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal สามารถรับได้จากการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ การศึกษาจะแสดงระดับฮีโมโกลบินในเลือด, สภาพของเซลล์, การปรากฏตัวของภาวะเกล็ดเลือดต่ำและเม็ดเลือดขาว, ระดับของธาตุเหล็กและธาตุอื่น ๆ เป็นต้น การวินิจฉัยโรคฮีโมโกลบินนูเรียที่สมบูรณ์และแม่นยำนั้นใช้เวลานานเนื่องจากสิ่งนี้ โรคสามารถซ่อนไว้อย่างระมัดระวังภายใต้หน้ากากของโรคอื่น ๆ

ดังนั้นวิธีที่สมเหตุสมผลที่สุดในการตรวจหาโรค Marchiafava-Miceli อย่างทันท่วงทีคือการตรวจป้องกันเป็นประจำ

การรักษาภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal

ระยะเวลาของการตรวจพบฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal จะกำหนดวิธีการรักษาที่จำเป็นและกำหนดการพยากรณ์ผลทางพยาธิวิทยาซึ่งในกรณีส่วนใหญ่จะไม่เอื้ออำนวย สิ่งนี้เกิดขึ้นเนื่องจากขาดสาเหตุเฉพาะของการพัฒนาและความเป็นไปไม่ได้ที่จะกำจัดมัน ดังนั้นจึงไม่มีวิธีการรักษาเฉพาะสำหรับ PNH

มาตรการการรักษาทั้งหมดมีวัตถุประสงค์เพื่อขจัดอาการแสดง วิธีเดียวที่มีประสิทธิภาพในการกำจัดเซลล์กลายพันธุ์อย่างสมบูรณ์คือการปลูกถ่ายไขกระดูกแดง (บริเวณที่เกิดเซลล์เม็ดเลือด)

ด้วยการพัฒนาของวิกฤตเม็ดเลือดแดงซึ่งเป็นรูปแบบเฉียบพลันของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกผู้ป่วยจะได้รับการถ่ายเซลล์เม็ดเลือดแดงหลายครั้ง อาจมีการถ่ายเลือดดังกล่าวตั้งแต่ 5 ครั้งขึ้นไป จำนวนขั้นตอนและความถี่ถูกกำหนดโดยการทดสอบซ้ำ ๆ และดำเนินการในระหว่างการเพิ่มจำนวนเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีข้อบกพร่องครั้งต่อไป

ในบางกรณีซึ่งพบไม่บ่อยนัก ม้ามจะถูกเอาออก สัญญาณที่นำไปสู่การตัดม้าม ได้แก่ การขยายอวัยวะอย่างรวดเร็วและการพัฒนาของกล้ามเนื้อหัวใจตาย

มาตรการการรักษาที่เหลือประกอบด้วยการใช้ยาประเภทต่าง ๆ ที่ช่วยบรรเทาอาการทางพยาธิวิทยา ยาหลักคือการเตรียมฮอร์โมนสเตียรอยด์ ไซโตสเตติก รวมถึงการเตรียมธาตุเหล็กและกรดโฟลิก

เนโรบอล

ยาที่แพทย์สั่งบ่อยที่สุดเพื่อต่อสู้กับอาการของฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal คือยา Nerobol นี่คือยาฮอร์โมนจากกลุ่มสเตียรอยด์อะนาโบลิก การออกฤทธิ์ของยามุ่งเป้าไปที่:

• เพื่อกระตุ้นการสังเคราะห์โปรตีนในร่างกายของผู้ป่วยซึ่งขาดเยื่อหุ้มเซลล์เม็ดเลือดแดงที่บกพร่อง
• มีผลดีต่อการเผาผลาญไนโตรเจน
• ชะลอการขับถ่ายโพแทสเซียมซัลเฟอร์และฟอสฟอรัสซึ่งจำเป็นสำหรับการสังเคราะห์โปรตีนตามปกติ
• กระตุ้นให้เกิดการตรึงแคลเซียมในกระดูกเพิ่มขึ้น

หลังจากรับประทานยานี้ ผู้ป่วยจะรู้สึกอยากอาหารเพิ่มขึ้น มวลกล้ามเนื้อเพิ่มขึ้นอย่างเข้มข้น กระดูกกลายเป็นปูนเร็วขึ้น และสภาพโดยทั่วไปของร่างกายดีขึ้นมาก

การใช้ยาเริ่มต้นด้วย 10 กรัมค่อยๆเพิ่มขึ้นเป็น 30 กรัมใน 1-2 โดสต่อวัน สำหรับเด็ก ปริมาณยาคือ 1 เม็ดวันเว้นวัน ในรูปแบบที่รุนแรงทุกวัน ระยะเวลาการบำบัดด้วย Nerobol คือ 2 ถึง 3 เดือน

หลังจากหยุดใช้ยาแล้ว ผู้ป่วยจำนวนมากพบว่าภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเพิ่มขึ้น

การใช้ Nerobol สามารถทำได้อย่างเคร่งครัดตามที่แพทย์กำหนด

เฮปาริน

เฮปารินเป็นสารต้านการแข็งตัวของเลือดโดยตรงซึ่งเป็นวิธีการยับยั้งการแข็งตัวของเลือด สำหรับภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal มีการกำหนดไว้เพื่อป้องกันลิ่มเลือดซึ่งทำให้โรคมีความซับซ้อน

ปริมาณและความถี่ของการบริหารเป็นรายบุคคลอย่างสมบูรณ์ขึ้นอยู่กับความซับซ้อนของพยาธิวิทยาและความเสี่ยงของการเกิดลิ่มเลือดในหลอดเลือด

ในตอนท้ายของเฮปารินแพทย์จะสั่งยาต้านการแข็งตัวของเลือดทางอ้อมเพื่อรักษาระดับการแข็งตัวของเลือดตามปกติ

Eculizumab เป็นยาที่ประกอบด้วยแอนติบอดี monochannel ของมนุษย์ หลักการออกฤทธิ์ของยาคือการหยุดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในหลอดเลือดและต่อต้านการเสริมเลือดโดยตรง ผลก็คือการทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงที่บกพร่องตามธรรมชาติโดยระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายจะหยุดลง

ยานี้เป็นยาที่แพงที่สุดในโลก กลไกการออกฤทธิ์และการพัฒนาผลที่อาจเกิดขึ้นจากการใช้งานยังไม่ได้รับการศึกษาอย่างเพียงพอ

อาหารเสริมธาตุเหล็กและกรดโฟลิก

หากมีการรบกวนการทำงานของไขกระดูกแดงจะเกิดการขาดธาตุเหล็กและกรดโฟลิกซึ่งจำเป็นต่อการสร้างเม็ดเลือดตามปกติ การบำบัดรักษาสำหรับ PNH รวมถึงการเตรียมองค์ประกอบย่อยเหล่านี้เพื่อชดเชยการสูญเสียทางพยาธิวิทยา

ปริมาณและวิธีการรับประทานยาจะถูกกำหนดโดยแพทย์ที่เข้ารับการรักษา ที่กำหนดบ่อยที่สุด ได้แก่ Sorbifer, Tardiferron, Ferretab, Fenyuls เป็นต้น ยาเหล่านี้ประกอบด้วยองค์ประกอบย่อยที่ซับซ้อนซึ่งจำเป็นสำหรับการสร้างอนุภาคเลือดแข็งตามปกติในไขกระดูกแดง

การสนับสนุนตับ

การบำบัดแบบเข้มข้นในการต่อสู้กับฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal มีผลอย่างมากต่อตับ หากไม่มีการบำบัดแบบประคับประคองตับ ก็อาจล้มเหลวได้ ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญที่ต้องรับประทานยาป้องกันตับ เหล่านี้อาจเป็นยาต่อไปนี้:

• มักซาร์;
• เฮพทรัล;
• คาร์ซิล.

นอกจากนี้ยังมีผลิตภัณฑ์อีกหลายชนิดที่ช่วยฟื้นฟูเซลล์ตับ ซึ่งรวมถึงฟักทอง แอปริคอตแห้ง สาหร่ายทะเล น้ำมันมะกอก ผลิตภัณฑ์จากนม และอื่นๆ อีกมากมาย สิ่งสำคัญคือในช่วงเวลาที่ตับอ่อนแอ อย่าทำให้รุนแรงขึ้นด้วยอาหารขยะ

หลังจากตรวจพบโรคแล้ว แพทย์ก็ให้คำทำนายที่ไม่ถูกต้อง สถิติบอกว่าหลังการวินิจฉัย ผู้ป่วยสามารถมีชีวิตอยู่ต่อไปได้ประมาณ 5 ปี

เนื่องจากไม่ทราบที่มาของโรคและความไม่แน่นอนเกี่ยวกับสาเหตุของการพัฒนาจึงไม่สามารถป้องกันภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal ได้

ข้อสรุป

โรค Marchiafava-Miceli หรือภาวะฮีโมโกลบินนูเรียออกหากินเวลากลางคืน paroxysmal เป็นโรคร้ายแรงที่แม้จะได้รับการดูแลอย่างเข้มข้นก็ถึงแก่ชีวิตได้ วิธีเดียวที่จะฟื้นตัวได้คือการปลูกถ่ายไขกระดูกสีแดงซึ่งมีการสร้างเซลล์เม็ดเลือด นอกจากนี้พยาธิวิทยายังรวมถึงการพัฒนาของโรคร่วมซึ่งไม่เป็นอันตรายต่อสภาพของผู้ป่วย

ดังนั้นแพทย์จึงประกาศอย่างเป็นเอกฉันท์ว่าวิธีที่ดีที่สุดในการป้องกันพยาธิสภาพคือการตรวจสุขภาพอย่างเต็มรูปแบบเป็นประจำ เป็นไปได้ว่าหากโรคอยู่ในระยะก่อตัวเท่านั้นก็สามารถกำจัดออกได้อย่างถาวร ด้วยความเจ็บป่วยร้ายแรง ปัญหาหลักคือเวลา คุณควรดูแลตัวเองและร่างกายของคุณ